豬(zhu)瘟(wen)病毒存(cun)活時間(jian) 豬(zhu)瘟(wen)疫苗
豬(zhu)(zhu)瘟俗稱(cheng)“爛腸瘟”,是由黃(huang)病(bing)毒(du)科豬(zhu)(zhu)瘟病(bing)毒(du)屬的豬(zhu)(zhu)瘟病(bing)毒(du)引起的一種急性(xing)、發(fa)熱、接觸(chu)性(xing)傳染(ran)傳染(ran)病(bing)。具有(you)高(gao)度(du)傳染(ran)性(xing)和(he)致死性(xing)。
1病情詳情
豬瘟俗(su)稱"爛腸瘟"是一種具有(you)高(gao)度(du)傳染(ran)性(xing)疫病(bing),是威(wei)脅養豬業的(de)主(zhu)要傳染(ran)病(bing)之(zhi)一,其特征是:急性(xing),呈敗血性(xing)變(bian)化,實質(zhi)器官(guan)出血,壞(huai)死(si)(si)和(he)梗死(si)(si);慢性(xing)呈纖維(wei)素性(xing)壞(huai)死(si)(si)性(xing)腸炎,后期(qi)常有(you)副傷寒及巴氏(shi)桿(gan)菌病(bing)繼發。
豬瘟是豬的一(yi)(yi)種急(ji)性接觸(chu)性傳(chuan)染(ran)病,又稱豬霍亂。1885年首先(xian)在美(mei)國(guo)(guo)發(fa)(fa)現,以后傳(chuan)播到世界各大洲。中國(guo)(guo)大部(bu)分省都(dou)有發(fa)(fa)生。1903年美(mei)國(guo)(guo)獸醫(yi)學家德希尼茲和(he)多賽特鑒定本病的病原(yuan)是披蓋病毒(du)科的瘟病毒(du)屬(Pestivirus)中的豬瘟病毒(du)。主(zhu)要通過直接接觸(chu),或由于接觸(chu)污染(ran)的媒介(jie)物而發(fa)(fa)病。消(xiao)化道、鼻腔粘膜和(he)破(po)裂的皮(pi)膚均是感染(ran)途徑。一(yi)(yi)年四季都(dou)可發(fa)(fa)生,以春夏多雨季節(jie)為多。
人工接種(zhong)的(de)豬,一(yi)般(ban)在(zai)36~48小時(shi)后(hou)體溫升(sheng)高。而自然感染(ran)的(de)潛伏(fu)期常(chang)(chang)(chang)(chang)為(wei)3~6天,間有(you)延(yan)長(chang)到24天的(de)。典型(xing)(xing)病(bing)例表現為(wei)最(zui)(zui)急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、亞(ya)急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)或慢性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)病(bing)程,死(si)亡(wang)(wang)(wang)率(lv)高。最(zui)(zui)急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)較少見(jian)(jian),病(bing)豬體溫升(sheng)高,常(chang)(chang)(chang)(chang)無(wu)其他癥狀(zhuang),1~2天內(nei)(nei)死(si)亡(wang)(wang)(wang)。急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)最(zui)(zui)常(chang)(chang)(chang)(chang)見(jian)(jian),體溫可(ke)(ke)上(shang)升(sheng)到41℃以上(shang),食欲減退或消失,可(ke)(ke)發生(sheng)眼(yan)結膜炎(yan)并(bing)有(you)膿(nong)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)分(fen)泌物(wu),鼻腔也常(chang)(chang)(chang)(chang)流(liu)出(chu)膿(nong)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)粘液,間有(you)嘔(ou)吐,有(you)時(shi)排(pai)泄(xie)物(wu)中帶(dai)血(xue)液,甚至便血(xue)。初期耳根(gen)、腹部、股內(nei)(nei)側的(de)皮(pi)膚常(chang)(chang)(chang)(chang)有(you)許(xu)多點狀(zhuang)出(chu)血(xue)或較大紅點。病(bing)程一(yi)般(ban)為(wei)1~2周(zhou),最(zui)(zui)后(hou)絕大多數死(si)亡(wang)(wang)(wang)。亞(ya)急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)常(chang)(chang)(chang)(chang)見(jian)(jian)于本病(bing)流(liu)行地區,病(bing)程可(ke)(ke)延(yan)至2~3周(zhou);有(you)的(de)轉為(wei)慢性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing),常(chang)(chang)(chang)(chang)拖延(yan)1~2個月。表現粘膜蒼白,眼(yan)瞼有(you)出(chu)血(xue)點。皮(pi)膚出(chu)現紫斑(ban),病(bing)豬極度消瘦。死(si)亡(wang)(wang)(wang)以仔豬為(wei)多,成年豬有(you)的(de)可(ke)(ke)以耐(nai)過(guo)。非典型(xing)(xing)病(bing)豬臨診癥狀(zhuang)不明顯(xian),呈慢性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing),常(chang)(chang)(chang)(chang)見(jian)(jian)于“架(jia)子豬”。剖(pou)檢時(shi)急(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)型(xing)(xing)以出(chu)血(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)病(bing)變(bian)為(wei)主,常(chang)(chang)(chang)(chang)見(jian)(jian)腎皮(pi)質和膀胱(guang)粘膜中有(you)小點出(chu)血(xue);腸(chang)系膜淋巴結腫脹,常(chang)(chang)(chang)(chang)出(chu)現出(chu)血(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)腸(chang)炎(yan),以大腸(chang)粘膜中的(de)鈕扣狀(zhuang)潰瘍為(wei)典型(xing)(xing)。
根據(ju)流行病學、臨診癥狀和病理變(bian)化(hua)可作出初(chu)診。實驗室診斷手段多采(cai)用(yong)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)螢光(guang)(guang)技(ji)術(shu)、酶(mei)聯免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)吸(xi)附測定(ding)法(fa)、血清中(zhong)和試驗、瓊脂(zhi)凝膠沉淀(dian)試驗等,比較(jiao)靈敏迅(xun)速,且特異性(xing)高。中(zhong)國現推廣應(ying)用(yong)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)螢光(guang)(guang)技(ji)術(shu)和酶(mei)聯免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)吸(xi)附測定(ding)法(fa)。采(cai)用(yong)抗豬(zhu)瘟血清在病初(chu)可有(you)一定(ding)療效,此外尚(shang)無其(qi)他特效藥物。中(zhong)國的豬(zhu)瘟兔化(hua)弱毒疫(yi)(yi)(yi)苗(miao)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)期可達一年(nian)以上,已被公認為一種安全性(xing)良好、免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)原性(xing)優(you)越、遺傳性(xing)穩(wen)定(ding)的弱毒疫(yi)(yi)(yi)苗(miao)。
本病(bing)與非洲豬瘟不(bu)同。非洲豬瘟在中國(guo)迄(qi)今(jin)尚未發現。
2流行特點
本病(bing)(bing)在自(zi)然條件下(xia)只(zhi)感(gan)染(ran)豬(zhu)(zhu)(zhu),不同年齡、性別、品種的(de)(de)(de)豬(zhu)(zhu)(zhu)和(he)野豬(zhu)(zhu)(zhu)都易感(gan),一年四季均可發生。病(bing)(bing)豬(zhu)(zhu)(zhu)是主(zhu)要傳染(ran)源,病(bing)(bing)豬(zhu)(zhu)(zhu)排泄(xie)物(wu)和(he)分泌物(wu),病(bing)(bing)死豬(zhu)(zhu)(zhu)和(he)臟器及尸體(ti)、急宰病(bing)(bing)豬(zhu)(zhu)(zhu)的(de)(de)(de)血(xue)、肉(rou)、內臟、廢水(shui)、廢料(liao)污染(ran)的(de)(de)(de)飼料(liao),飲水(shui)都可散(san)播病(bing)(bing)毒,豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟的(de)(de)(de)傳播主(zhu)要通過接觸,經消化道(dao)感(gan)染(ran)。此外,患病(bing)(bing)和(he)弱(ruo)毒株感(gan)染(ran)的(de)(de)(de)母豬(zhu)(zhu)(zhu)也可以(yi)經胎(tai)盤垂直感(gan)染(ran)胎(tai)兒,產生弱(ruo)仔豬(zhu)(zhu)(zhu)、死胎(tai)、木乃伊胎(tai)等。
3潛伏期
簡介
一(yi)般為5—7天(tian),根據臨床癥狀可分為最急性(xing)、急性(xing)、慢性(xing)和(he)溫(wen)和(he)型四種類型。
最急性型
A:最急性(xing)型:病豬常無明顯癥狀,突然死亡,一般(ban)出現在初(chu)發病地區和流行初(chu)期。
急性型
B:急性型:病豬(zhu)精神差,發熱(re),體溫在40—42℃之間(jian),呈現稽留熱(re),喜臥、弓背、寒(han)顫及(ji)行走搖晃。食(shi)欲減退(tui)(tui)或(huo)廢絕,喜歡飲水,有(you)的(de)發生嘔吐(tu)。結膜發炎,流膿性分泌物,將上下眼瞼(jian)粘住,不(bu)能張(zhang)開,鼻(bi)流膿性鼻(bi)液(ye)(ye)。初期便秘(mi),干硬(ying)的(de)糞(fen)球表面附有(you)大量白色的(de)腸粘液(ye)(ye),后(hou)期腹瀉,糞(fen)便惡臭,帶有(you)粘液(ye)(ye)或(huo)血(xue)液(ye)(ye),病豬(zhu)的(de)鼻(bi)端、耳后(hou)根、腹部及(ji)四肢內側的(de)皮(pi)膚(fu)及(ji)齒齦、唇內、肛門等(deng)處粘膜出(chu)現針尖(jian)狀(zhuang)出(chu)血(xue)點,指壓不(bu)退(tui)(tui)色,腹股溝(gou)淋巴結腫大。公豬(zhu)包(bao)皮(pi)發炎,陰鞘積尿,用手擠壓時有(you)惡臭渾濁液(ye)(ye)體射出(chu)。小豬(zhu)可(ke)出(chu)現神經癥狀(zhuang),表現磨牙(ya)、后(hou)退(tui)(tui)、轉圈、強直、側臥及(ji)游泳狀(zhuang),甚至昏迷等(deng)。
慢性型
C:慢性型:多由急性型轉變(bian)而來,體溫時高時低,食(shi)欲不振(zhen),便(bian)秘(mi)與腹瀉交替出現(xian),逐(zhu)漸消瘦、貧(pin)血,衰弱(ruo),被毛粗亂,行走(zou)時兩后肢搖(yao)晃無(wu)力(li),行走(zou)不穩(wen)。有些病(bing)豬的耳尖(jian)、尾端(duan)和(he)四肢下部成(cheng)藍(lan)紫色或壞死、脫落,病(bing)程可長(chang)達(da)一個月以上(shang),最(zui)后衰弱(ruo)死亡(wang),死亡(wang)率極高。
溫和型
D:溫(wen)和(he)型(xing):又稱非(fei)典(dian)型(xing),主要發生較(jiao)多(duo)的是(shi)斷奶后(hou)的仔豬(zhu)(zhu)及架子豬(zhu)(zhu),表(biao)現癥狀(zhuang)輕微,不(bu)(bu)典(dian)型(xing),病情(qing)緩和(he),病理(li)變化不(bu)(bu)明顯,病程(cheng)較(jiao)長(chang)體(ti)溫(wen)稽留在40℃左右,皮(pi)膚無出(chu)血小點,但有(you)(you)淤血和(he)壞(huai)死,食欲時(shi)(shi)(shi)好時(shi)(shi)(shi)壞(huai),糞便(bian)時(shi)(shi)(shi)干時(shi)(shi)(shi)稀,病豬(zhu)(zhu)十(shi)分(fen)瘦弱,致(zhi)死率較(jiao)高,也有(you)(you)耐過的,但生長(chang)發育嚴(yan)重受阻(zu)。
4剖檢病變
急性型
全身皮膚、漿膜(mo)、粘(zhan)膜(mo)和內臟器官有不同程度(du)的(de)出(chu)血。全身淋巴結腫(zhong)脹,
多(duo)汁、充血(xue)(xue)(xue)、出(chu)血(xue)(xue)(xue)、外表(biao)呈現紫黑(hei)色,切面如大(da)理石狀,腎臟(zang)(zang)色淡(dan),皮質有(you)針(zhen)尖至小(xiao)米狀的出(chu)血(xue)(xue)(xue)點,脾臟(zang)(zang)有(you)梗寒,以邊緣(yuan)多(duo)見,呈色黑(hei)小(xiao)紫塊,喉頭粘膜及(ji)扁桃體出(chu)血(xue)(xue)(xue)。膀(bang)胱粘膜有(you)散在的出(chu)血(xue)(xue)(xue)點。胃、腸(chang)粘膜呈卡他(ta)性炎(yan)癥。大(da)腸(chang)的回盲(mang)瓣處形成(cheng)紐扣(kou)狀潰瘍。
慢性型
主要表現為壞死性(xing)腸炎,全身性(xing)出血(xue)變(bian)化不明(ming)顯,由于鈣(gai)磷(lin)代謝的擾(rao)亂,
斷奶病(bing)豬可見肋骨末端和軟骨組織變界處,因(yin)骨化(hua)障礙而形(xing)成的黃色骨化(hua)線(xian)。
實驗室診斷
在口述(shu)診斷的基礎上,可用免疫熒光(guang)抗(kang)體檢查,酶標記組織(zhi)抗(kang)
原定位法,免體交互免疫試驗(yan),血清中和試驗(yan),豬瘟單克隆抗體純化酶聯(lian)免疫吸附試驗(yan)等方(fang)法之一進行確診。
5防治措施
預防:A、免(mian)疫接(jie)種。B、開展免(mian)疫監測,采用酶聯(lian)免(mian)疫吸(xi)附試(shi)驗或正(zheng)向間(jian)
接血(xue)凝試驗等方法開(kai)展(zhan)免疫抗體監(jian)測。C、及時淘(tao)汰(tai)隱(yin)性感染帶毒(du)種豬(zhu)。D、堅持(chi)自繁(fan)自養(yang),全進全出的飼(si)養(yang)管理制度。E、做(zuo)好(hao)豬(zhu)場、豬(zhu)舍的隔離、衛生、消毒(du)和殺蟲工作,減少豬(zhu)瘟病毒(du)的侵(qin)入(ru)。
6疫情處理
A、立即(ji)報告,及時診斷。B、劃定疫(yi)(yi)點。C、封鎖疫(yi)(yi)點、疫(yi)(yi)區(qu)。D、處(chu)(chu)理(li)病豬(zhu),做出無害(hai)化(hua)處(chu)(chu)理(li)。E、緊急預防接(jie)種。疫(yi)(yi)區(qu)里(li)的(de)假定健康豬(zhu)和受威(wei)脅(xie)地區(qu)的(de)生豬(zhu)即(ji)接(jie)種豬(zhu)瘟(wen)免弱毒(du)疫(yi)(yi)苗。F、消毒(du),認真消毒(du)被污(wu)染的(de)場地、圈舍、用具等,糞便堆積發酵、無害(hai)化(hua)處(chu)(chu)理(li)豬(zhu)瘟(wen)(hogcholera,HC或SWliqefever,sF)
7疫苗種類
豬(zhu)瘟(wen)是一種(zhong)(zhong)傳(chuan)染性非(fei)常(chang)強的傳(chuan)染病,常(chang)給養豬(zhu)業造成毀滅性損失。預防豬(zhu)瘟(wen)最(zui)有效的方法(fa)就是接種(zhong)(zhong)豬(zhu)瘟(wen)疫苗。為了使(shi)廣大養豬(zhu)戶正確選(xuan)擇和有效使(shi)用豬(zhu)瘟(wen)疫苗,這里將豬(zhu)瘟(wen)疫苗的種(zhong)(zhong)類和使(shi)用方法(fa)簡介如下: 疫苗的種(zhong)(zhong)類
目前市場上預防豬瘟(wen)的(de)疫苗主要有(you)以下(xia)三種:
1.豬瘟活疫苗(I)———乳兔苗。
2.豬瘟活疫苗(miao)(miao)(II)———細胞苗(miao)(miao)。
3.豬瘟活疫苗(miao)(I)———淋(lin)脾(pi)苗(miao)。
8使用方法
豬瘟(wen)活疫(yi)(yi)苗(miao)(I)———乳兔(tu)苗(miao)的(de)(de)用(yong)(yong)法該(gai)疫(yi)(yi)苗(miao)為(wei)(wei)肌(ji)肉(rou)或皮下(xia)注(zhu)射。使(shi)用(yong)(yong)時(shi)按瓶簽注(zhu)明(ming)頭(tou)份用(yong)(yong)無菌生(sheng)理鹽水按每頭(tou)份1毫(hao)升(sheng)(sheng)稀釋(shi),大小(xiao)豬均為(wei)(wei)1毫(hao)升(sheng)(sheng)。該(gai)疫(yi)(yi)苗(miao)禁止與(yu)菌苗(miao)同(tong)時(shi)注(zhu)射。注(zhu)射本(ben)苗(miao)后(hou)(hou)(hou)可能有(you)少數豬在(zai)(zai)1天-2天內發生(sheng)反應(ying)(ying),但3日(ri)后(hou)(hou)(hou)即可恢(hui)復正(zheng)常。注(zhu)苗(miao)后(hou)(hou)(hou)如(ru)出現過(guo)敏反應(ying)(ying),應(ying)(ying)及(ji)時(shi)注(zhu)射抗過(guo)敏藥物,如(ru)腎上腺素等。該(gai)疫(yi)(yi)苗(miao)要在(zai)(zai)-15℃以下(xia)避光保存,有(you)效期為(wei)(wei)12個(ge)月(yue)。該(gai)疫(yi)(yi)苗(miao)稀釋(shi)后(hou)(hou)(hou),應(ying)(ying)放在(zai)(zai)冷藏容器內,嚴禁結冰,如(ru)氣溫(wen)在(zai)(zai)15℃以下(xia),6小(xiao)時(shi)內要用(yong)(yong)完;如(ru)氣溫(wen)在(zai)(zai)15℃-27℃,應(ying)(ying)在(zai)(zai)3小(xiao)時(shi)內用(yong)(yong)完。注(zhu)射的(de)(de)時(shi)間最好是進食后(hou)(hou)(hou)2小(xiao)時(shi)或進食前。
豬瘟活疫(yi)苗(miao)(II)———細胞苗(miao)的(de)用法該疫(yi)苗(miao)大小(xiao)豬都(dou)可使(shi)用。按(an)標簽注(zhu)明頭(tou)份(fen),每頭(tou)份(fen)加入無菌生理鹽水(shui)1毫升稀(xi)釋(shi)(shi)后(hou),大小(xiao)豬均皮下(xia)或肌肉注(zhu)射(she)1毫升。注(zhu)射(she)4天后(hou)即可產生免(mian)(mian)疫(yi)力,注(zhu)射(she)后(hou)免(mian)(mian)疫(yi)期(qi)(qi)可達12個月。該疫(yi)苗(miao)宜在(zai)-15℃以(yi)下(xia)保存,有效期(qi)(qi)為18個月。注(zhu)射(she)前(qian)應了解當地確無疫(yi)病流行。隨用隨稀(xi)釋(shi)(shi),稀(xi)釋(shi)(shi)后(hou)的(de)疫(yi)苗(miao)應放冷暗處(chu),并(bing)限2小(xiao)時內用完。斷奶(nai)前(qian)仔豬可接種4頭(tou)份(fen)疫(yi)苗(miao),以(yi)防母源抗體干擾。
豬瘟活疫(yi)(yi)苗(I)———淋脾苗的(de)用法(fa)該疫(yi)(yi)苗為(wei)肌(ji)肉或皮下注(zhu)射。使用時(shi)(shi)按(an)瓶簽注(zhu)明頭(tou)份(fen)用無菌生理鹽水按(an)每(mei)頭(tou)份(fen)1毫(hao)升稀釋,大小(xiao)豬均1毫(hao)升。該疫(yi)(yi)苗應在(zai)(zai)-15℃以(yi)下避(bi)光保存,有效期為(wei)12個月。疫(yi)(yi)苗稀釋后(hou),應放在(zai)(zai)冷藏(zang)容器內,嚴禁結冰。如(ru)氣溫在(zai)(zai)15℃以(yi)下,6小(xiao)時(shi)(shi)內用完(wan)。如(ru)氣溫在(zai)(zai)15℃-27℃,則應在(zai)(zai)3小(xiao)時(shi)(shi)內用完(wan)。注(zhu)射的(de)時(shi)(shi)間(jian)最好是進食后(hou)2小(xiao)時(shi)(shi)或進食前。
注意事項
以上三種(zhong)疫苗在沒(mei)有豬(zhu)瘟流行的地區,斷奶后無(wu)母源抗體(ti)的仔豬(zhu),注(zhu)射1次即可。
在有疫(yi)情(qing)威脅(xie)時,仔豬可(ke)在21日齡-30日齡和65日齡左右各注射1次(ci)。
被注(zhu)射疫苗的豬(zhu)必須健康無病(bing)(bing),如豬(zhu)體質瘦(shou)弱、有病(bing)(bing),體溫升(sheng)高(gao)或(huo)食欲不(bu)振等均(jun)不(bu)應(ying)注(zhu)射。
注射免疫用各種(zhong)工具,須(xu)在用前消毒。每注射1頭(tou)豬,必須(xu)更(geng)換一(yi)次煮沸消毒過的(de)針頭(tou),嚴禁(jin)打“飛針”。
注(zhu)射部位應(ying)先剪(jian)毛,然后(hou)用碘酒(jiu)消毒,再(zai)進行(xing)注(zhu)射。
以上三(san)種疫(yi)苗如果在(zai)有豬瘟發生(sheng)的(de)地區使用(yong),必須由獸醫嚴(yan)格指(zhi)導(dao),注射(she)后防(fang)疫(yi)人員(yuan)應在(zai)1周內進行逐日觀(guan)察。
9治療進展
簡介
在歐洲(zhou)稱為古典(dian)豬(zhu)瘟(wen){classicalswinefever.CSF),是(shi)由豬(zhu)瘟(wen)病(bing)毒(du)(HCV或CSFV)引(yin)起的(de)一種高度接觸性傳(chuan)染(ran)(ran)病(bing),豬(zhu)是(shi)該病(bing)毒(du)唯一的(de)自然宿主(zhu)。于(yu)(yu)1833年首次(ci)發現于(yu)(yu)美國(guo)俄亥(hai)俄州,百余年來(lai)(lai)其(qi)(qi)流行遍及全球。國(guo)際獸疫(yi)(yi)(yi)局(ju)將(jiang)其(qi)(qi)定(ding)為A類(lei)傳(chuan)染(ran)(ran)病(bing),中(zhong)國(guo)《動物(wu)防(fang)疫(yi)(yi)(yi)法》將(jiang)其(qi)(qi)列為一類(lei)傳(chuan)染(ran)(ran)病(bing).是(shi)目前危害(hai)中(zhong)國(guo)養(yang)豬(zhu)業發展的(de)主(zhu)要(yao)疫(yi)(yi)(yi)病(bing)之一。中(zhong)國(guo)豬(zhu)瘟(wen)兔化弱(ruo)毒(du)疫(yi)(yi)(yi)苗在防(fang)治豬(zhu)瘟(wen)中(zhong)曾起到決定(ding)性作用,但近(jin)幾年來(lai)(lai)出現免(mian)疫(yi)(yi)(yi)效果(guo)不理想.應(ying)用組織培養(yang)弱(ruo)毒(du)苗也發生免(mian)疫(yi)(yi)(yi)失(shi)(shi)敗,究其(qi)(qi)原因(yin)比較多(duo)。由于(yu)(yu)豬(zhu)瘟(wen)造成的(de)經濟(ji)損(sun)失(shi)(shi)巨大.歷(li)來(lai)(lai)是(shi)各國(guo)研究的(de)熱點。
csFV基(ji)因結構(gou)與功能的(de)研(yan)究
CSFV為(wei)有囊膜病(bing)毒,40--60nm,單股(gu)正鏈RNA。CSFV基(ji)(ji)因組長約123kb,僅含有一(yi)個大的(de)(de)開放性閱讀(du)框架(ORF).此ORF翻譯成(cheng)(cheng)含3898個氨基(ji)(ji)酸殘基(ji)(ji).分(fen)子(zi)量約438kDa的(de)(de)多聚蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai),并進一(yi)步在病(bing)毒和(he)宿主(zhu)細(xi)胞(bao)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶的(de)(de)作用下(xia)加工(gong)為(wei)成(cheng)(cheng)熟(shu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai).cSFV的(de)(de)所有結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)和(he)非結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)均(jun)由該ORF所編碼(ma)(ma)。ORF兩側是5’一(yi)端非翻譯區(5’-UTR)和(he)3’一(yi)端非翻譯區(3’-UTR).且(qie)5’一(yi)端無帽(mao)子(zi)結(jie)(jie)構(gou).3’一(yi)端無poly(A)尾巴。這(zhe)一(yi)大前體蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)以共翻譯和(he)后翻譯的(de)(de)形(xing)式在細(xi)胞(bao)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶和(he)病(bing)毒特異蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)酶作用下(xia).加工(gong)成(cheng)(cheng)結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)和(he)非結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai),其結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)和(he)非結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)在病(bing)毒RNA上的(de)(de)編碼(ma)(ma)順序為(wei)Npro、c、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。NS2-3可被加工(gong)成(cheng)(cheng)NS2、NS3(P80),除c、E0、E1和(he)E2為(wei)結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)外.其余均(jun)為(wei)非結(jie)(jie)構(gou)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)。
目前已(yi)經(jing)定位的CSFV蛋(dan)白有5種,即Npro、c、Erns(E0)、E1和E2.它們均(jun)由CSFV的RNA-ORF5’一端所編碼。在結構蛋(dan)白中,最具(ju)有免(mian)疫防制(zhi)研究(jiu)價值的是EO和E2。
1.1c,是(shi)病毒的衣殼蛋(dan)(dan)白,也(ye)稱p14,由病毒ORF中的Setl69~Ala267組(zu)成.是(shi)CSFV核衣殼蛋(dan)(dan)白其N端由CSFV非結構蛋(dan)(dan)白p23的水解(jie)作用(yong)產生,c端可(ke)能是(shi)由宿主細胞的信號肽酶作用(yong)所(suo)致。
1.2gp44/48,是病(bing)毒的(de)一種囊(nang)膜糖蛋(dan)白.也稱(cheng)Erns.舊稱(cheng)E0。有(you)9個可能(neng)的(de)糖基化位點,去糖基的(de)蛋(dan)白骨架分(fen)(fen)子(zi)量(liang)約26KDa,由病(bing)毒ORF中(zhong)Glu168-Ala494組成。在(zai)(zai)感染細胞(bao)中(zhong)gp44/48在(zai)(zai)內(nei)質網內(nei)積累(lei),并(bing)可存在(zai)(zai)于(yu)細胞(bao)膜表面或被分(fen)(fen)泌到胞(bao)外。在(zai)(zai)病(bing)毒粒子(zi)中(zhong)gp44/48以97KDa的(de)同源二(er)聚(ju)體形式(shi)存在(zai)(zai)于(yu)囊(nang)膜表面。由于(yu)其(qi)分(fen)(fen)子(zi)內(nei)缺乏(fa)疏水的(de)膜錨定(ding)區,與病(bing)毒囊(nang)膜結合力(li)弱.易從囊(nang)膜上游(you)離下來。gp44/48可誘導產(chan)生豬(zhu)瘟的(de)中(zhong)和抗體.免疫(yi)豬(zhu)可誘導產(chan)生對致(zhi)死量(liang)CSFV的(de)保護性免疫(yi)。由于(yu)編碼gp44/48的(de)核酸序列(lie)(lie)在(zai)(zai)屬內(nei)比編碼gp55的(de)序列(lie)(lie)保守程度高,因此(ci)Erns可作為防治豬(zhu)瘟的(de)一種靶蛋(dan)白。
Erns具有RNase活性,作用于(yu)單鏈的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)RNA.且對富含u的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)序(xu)列活性最高。4ng的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Ems在(zai)體外即可將(jiang)CSFV基(ji)(ji)因(yin)(yin)組RNA完(wan)全降解。推(tui)測Ems沒有將(jiang)其(qi)(qi)(qi)自(zi)(zi)身(shen)RNA降解掉的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)原因(yin)(yin)可能是(shi)由于(yu)空間上的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)隔(ge)離。在(zai)宿主(zhu)(zhu)細(xi)胞中,新合成(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Erns在(zai)內質網(wang)腔內.而其(qi)(qi)(qi)基(ji)(ji)因(yin)(yin)組RNA則在(zai)胞漿中:在(zai)病(bing)(bing)毒(du)粒子中,定位(wei)于(yu)囊膜(mo)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Ems與(yu)其(qi)(qi)(qi)基(ji)(ji)因(yin)(yin)組RNA間隔(ge)著衣殼(ke)蛋白.因(yin)(yin)此Erns是(shi)不(bu)會降解其(qi)(qi)(qi)自(zi)(zi)身(shen)RNA的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。編碼Ems的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)因(yin)(yin)是(shi)瘟病(bing)(bing)毒(du)屬病(bing)(bing)毒(du)所特有的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de).黃病(bing)(bing)毒(du)科中其(qi)(qi)(qi)他病(bing)(bing)毒(du)基(ji)(ji)因(yin)(yin)組內無此基(ji)(ji)因(yin)(yin).推(tui)測該(gai)基(ji)(ji)因(yin)(yin)是(shi)病(bing)(bing)毒(du)與(yu)宿主(zhu)(zhu)細(xi)胞的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)RNase基(ji)(ji)因(yin)(yin)重組得到的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。
1.3gp33,是CSFV囊膜(mo)糖(tang)蛋白(bai).也(ye)稱E1,去糖(tang)基的蛋白(bai)骨架分子量(liang)21.8KDa.由195個氨基酸殘基(ORF編碼的Leu495至(zhi)GlY68。組成(cheng),內(nei)(nei)有3個可能(neng)的糖(tang)基化(hua)位點(dian)。其蛋白(bai)骨架中(zhong)有兩段(duan)(duan)疏水序列(Leu548~Pro579~Gly689)。在多聚蛋白(bai)轉位過程(cheng)中(zhong),前一(yi)段(duan)(duan)是E1向(xiang)內(nei)(nei)質(zhi)網(wang)腔轉位的終止信號(hao),后一(yi)段(duan)(duan)則充(chong)當(dang)E2轉位的信號(hao)肽(tai),除此之外,這二段(duan)(duan)疏水區還充(chong)當(dang)E1的膜(mo)錨定位點(dian)。E1在病毒囊膜(mo)內(nei)(nei).不能(neng)誘導豬產生抗體(ti)。
1.4gp55.為CSFV的(de)(de)另一囊膜糖蛋白(bai),又稱(cheng)為E2,是病(bing)毒主(zhu)要的(de)(de)抗(kang)原(yuan)蛋白(bai),也是三個病(bing)毒糖蛋白(bai)中(zhong)保守(shou)性最(zui)低(di).最(zui)易變異(yi)的(de)(de)分子。gp55常(chang)以100kDa的(de)(de)同源二聚體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)及與gp33形成75kDa的(de)(de)異(yi)源二聚體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)形式存在(zai)于(yu)病(bing)毒粒子及CSFV感(gan)染(ran)的(de)(de)細(xi)胞(bao)表(biao)面(mian)。在(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)外gp55可(ke)誘(you)導產(chan)生病(bing)毒的(de)(de)中(zhong)和抗(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti),體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)內(nei)可(ke)誘(you)導產(chan)生抗(kang)CSFV的(de)(de)攻(gong)擊的(de)(de)抗(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)。Hulst用20μg昆曳細(xi)胞(bao)表(biao)達的(de)(de)E2雙相油包水乳(ru)劑免(mian)疫豬,能抵(di)抗(kang)100LD50CSFVBrescia毒株強毒的(de)(de)攻(gong)擊。gp55的(de)(de)蛋白(bai)骨架由(you)(you)370個氨基(ji)酸(suan)(ORF編碼的(de)(de)690-1060氨基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji))組成.并(bing)以其c端的(de)(de)40個疏水氨基(ji)酸(suan)錨(mao)定(ding)在(zai)膜上(shang)。由(you)(you)于(yu)糖基(ji)化程度不(bu)同。E2的(de)(de)分子量(liang)可(ke)為51-58kDa。E2分子內(nei)的(de)(de)15個Cys殘(can)基(ji)在(zai)屬內(nei)均(jun)保守(shou),其中(zhong)N端6個Cys殘(can)基(ji)參(can)與抗(kang)原(yuan)結構域的(de)(de)形成,c端9個Cys殘(can)基(ji)則參(can)與同源、異(yi)源二聚體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)形成。
gp55的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)決定區(qu)在其N端部分(ORF編(bian)碼的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第690-866氨基(ji)酸),可分為2個(ge)(ge)獨立(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元(yuan)(yuan),四個(ge)(ge)抗(kang)(kang)原(yuan)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)域(yu)A.B.C,D。其中(zhong)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)域(yu)A又可分為A.,A2,A3三個(ge)(ge)亞(ya)域(yu)。結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)域(yu)B.c屬于(yu)一(yi)個(ge)(ge)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元(yuan)(yuan).均(jun)為中(zhong)和(he)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)合位(wei)點(dian).由(you)ORF編(bian)碼的(de)(de)(de)(de)(de)(de)690~800氨基(ji)酸殘(can)(can)基(ji)參(can)與(yu)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)成(cheng)。Cys693與(yu)CYS7377形成(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)二硫鍵(jian)對結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)域(yu)B、c的(de)(de)(de)(de)(de)(de)空間結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)至(zhi)關重(zhong)要。另一(yi)個(ge)(ge)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元(yuan)(yuan)含A.D抗(kang)(kang)原(yuan)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)域(yu)。A1、A2亞(ya)區(qu)定位(wei)于(yu)第795-851氨基(ji)酸殘(can)(can)基(ji),在種內(nei)保守A1是一(yi)個(ge)(ge)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)中(zhong)和(he)位(wei)點(dian)。亞(ya)區(qu)A3定位(wei)于(yu)766-813氨基(ji)酸殘(can)(can)基(ji).而氨基(ji)酸殘(can)(can)基(ji)766-800則參(can)與(yu)了結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)域(yu)D的(de)(de)(de)(de)(de)(de)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)成(cheng)。cys792~Cys856及Cys818~Cys828間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)二硫鍵(jian)對這個(ge)(ge)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元(yuan)(yuan)空問結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)形成(cheng)是必(bi)需的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。連接這兩個(ge)(ge)結(jie)構(gou)(gou)(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)是一(yi)段(duan)屬內(nei)保守的(de)(de)(de)(de)(de)(de)疏水序列(lie).推測(ce)這段(duan)序列(lie)參(can)與(yu)了病毒(du)侵入細胞過程中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜(mo)融(rong)合過程。
1.5Npro,也稱p23,CSFV的(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)結(jie)構蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai),是(shi)ORF編碼的(de)(de)(de)(de)(de)多(duo)聚(ju)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)N端的(de)(de)(de)(de)(de)第一個(ge)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質。Npro由(you)168個(ge)氨基(ji)(ji)酸組(zu)成.具有蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質水解(jie)酶活(huo)性(xing)(xing),能(neng)(neng)以自催(cui)化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)方式從正(zheng)在(zai)翻譯的(de)(de)(de)(de)(de)多(duo)聚(ju)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)上斷(duan)裂(lie)(lie)下(xia)(xia)來,成為(wei)(wei)成熟(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)毒蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。序列(lie)比(bi)較發現,編碼p23的(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)因在(zai)瘟病(bing)毒屬中(zhong)是(shi)較為(wei)(wei)保守的(de)(de)(de)(de)(de)。它(ta)的(de)(de)(de)(de)(de)斷(duan)裂(lie)(lie)位(wei)點(dian)(dian)在(zai)Cysl68與(yu)其(qi)下(xia)(xia)游(you)的(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)毒核衣殼p14N端第一個(ge)氨基(ji)(ji)酸ser。間。Npro的(de)(de)(de)(de)(de)cys69和(he)His130可(ke)能(neng)(neng)位(wei)于其(qi)酶活(huo)性(xing)(xing)中(zhong)心.能(neng)(neng)水解(jie)斷(duan)裂(lie)(lie)Cys與(yu)Ala及Gly與(yu)Ser間的(de)(de)(de)(de)(de)肽鍵,斷(duan)列(lie)位(wei)點(dian)(dian)位(wei)于活(huo)性(xing)(xing)His殘(can)基(ji)(ji)下(xia)(xia)游(you)38個(ge)氨基(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji)處(chu)。Npro不參與(yu)CSFV的(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)構及非(fei)結(jie)構蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)加工過(guo)程.其(qi)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶活(huo)性(xing)(xing)在(zai)cSFV增殖過(guo)程中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)作用還不清楚。Rumenapf等人(ren)使用定(ding)點(dian)(dian)突變技(ji)術對參與(yu)Npro催(cui)化(hua)活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)氨基(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji)進行測定(ding).確定(ding)了其(qi)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)GIu22、His49和(he)Cys69是(shi)保持Npro蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶活(huo)性(xing)(xing)所(suo)必需的(de)(de)(de)(de)(de)氨基(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji),而His130并非(fei)必須。
實驗窒診斷
目前豬瘟流行常常表現(xian)無(wu)規律的地區性散發.發病特征不典型(xing),以發熱、精神沉郁、食(shi)欲減退、咳嗽(sou)、共(gong)濟失調、結(jie)膜炎以及腹(fu)瀉、圍產期死(si)亡、死(si)胎(tai)、流產。中等毒(du)力及強毒(du)感染有(you)以上這些(xie)癥狀,并且在(zai)豬群中不分年齡快速(su)傳播。結(jie)合(he)這些(xie)臨床癥狀進行實驗室診斷是(shi)必要(yao)的。
2.1病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)快(kuai)速(su)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)對于(yu)(yu)豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)的(de)(de)(de)診斷具(ju)有特別重要的(de)(de)(de)意義。目前快(kuai)速(su)、敏(min)感(gan)的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)方(fang)(fang)(fang)法(fa)是(shi)利用(yong)(yong)(yong)免疫(yi)(yi)組化技術檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)扁(bian)桃體(ti)組織(zhi)(zhi)。扁(bian)桃體(ti)中豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)可早在感(gan)染后2d檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)到.淋巴結(jie)、脾臟以(yi)及(ji)胰腺均(jun)(jun)可作(zuo)為病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)早期檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)的(de)(de)(de)組織(zhi)(zhi)樣(yang)品(pin)。DelasMulas等及(ji)Narita等報道(dao)了一種檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)免疫(yi)(yi)組化方(fang)(fang)(fang)法(fa).即利用(yong)(yong)(yong)針對E2糖蛋(dan)白的(de)(de)(de)單克(ke)隆抗(kang)(kang)體(ti)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)福(fu)爾馬(ma)林固定、石蠟包埋的(de)(de)(de)組織(zhi)(zhi)樣(yang)品(pin)的(de)(de)(de)免疫(yi)(yi)組化方(fang)(fang)(fang)法(fa)。該方(fang)(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)優點是(shi)能(neng)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)長期保存(cun)的(de)(de)(de)樣(yang)品(pin),缺點是(shi)較費(fei)時.而且(qie)福(fu)爾馬(ma)林固定后的(de)(de)(de)組織(zhi)(zhi)不能(neng)再進行(xing)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)分離。利用(yong)(yong)(yong)鏈酶一生物素(su)一過氧(yang)化物酶(ABc)的(de)(de)(de)免疫(yi)(yi)組化方(fang)(fang)(fang)法(fa)也能(neng)用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)組織(zhi)(zhi)切片(pian)上抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)。據報道(dao)流式(shi)細胞儀也可進行(xing)血樣(yang)中豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce),但其敏(min)感(gan)性較低。以(yi)豬(zhu)(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)強毒(du)(du)(du)感(gan)染仔(zi)豬(zhu)(zhu),利用(yong)(yong)(yong)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)捕獲(huo)ELISA方(fang)(fang)(fang)法(fa)檢(jian)(jian)(jian)(jian)測(ce)其病(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)血癥,結(jie)果表明該方(fang)(fang)(fang)法(fa)可用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)豬(zhu)(zhu)群中流行(xing)病(bing)(bing)(bing)學的(de)(de)(de)調查。但其敏(min)感(gan)性以(yi)及(ji)特異性均(jun)(jun)低于(yu)(yu)傳(chuan)統(tong)的(de)(de)(de)實驗室方(fang)(fang)(fang)法(fa)。
2.2感(gan)染(ran)性(xing)(xing)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)(de)檢測(ce)病(bing)(bing)毒(du)分離(li)是(shi)目(mu)前體外檢測(ce)感(gan)染(ran)性(xing)(xing)豬瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du)最特異(yi)的(de)(de)(de)方法(fa)。已(yi)報(bao)道(dao)有(you)幾種(zhong)方法(fa)可以(yi)從(cong)組織、全血(xue)中(zhong)分離(li)病(bing)(bing)毒(du),白(bai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)是(shi)分離(li)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)(de)最佳(jia)樣品。然而(er)一(yi)(yi)(yi)些研究人員發現,白(bai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)以(yi)及(ji)單(dan)核(he)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在(zai)動(dong)物感(gan)染(ran)后較長時間才能感(gan)染(ran)病(bing)(bing)毒(du)。因此(ci),對(dui)于(yu)豬瘟(wen)(wen)(wen)的(de)(de)(de)早期診斷.全血(xue)或血(xue)漿(jiang)可能比白(bai)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)更為(wei)(wei)敏(min)感(gan)。最常用于(yu)豬瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du)分離(li)的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)為(wei)(wei)豬腎細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(PKl5或SK6)或豬睪丸細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(sT)。日本建立了一(yi)(yi)(yi)種(zhong)豬腎由來(lai)的(de)(de)(de)傳代細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)系(xi)(FS-L3).FS-L3細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在(zai)不(bu)感(gan)染(ran)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)(de)情況下呈(cheng)大園球狀.數倍(bei)至(zhi)數十倍(bei)于(yu)普(pu)通細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao).但一(yi)(yi)(yi)旦感(gan)染(ran)了豬瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du),FS-L3細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)大園球狀即消(xiao)失(shi).這一(yi)(yi)(yi)特性(xing)(xing)已(yi)被用作豬瘟(wen)(wen)(wen)病(bing)(bing)毒(du)的(de)(de)(de)中(zhong)和試驗(yan)等各(ge)種(zhong)生物學特性(xing)(xing)的(de)(de)(de)測(ce)定。經研究發現,產生細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)病(bing)(bing)變的(de)(de)(de)毒(du)株(zhu)是(shi)因為(wei)(wei)它的(de)(de)(de)遺(yi)傳基因發生了變化。從(cong)5’末端的(de)(de)(de)第(di)一(yi)(yi)(yi)個核(he)苷(gan)酸(suan)到4764個核(he)苷(gan)酸(suan)均已(yi)缺失(shi).其中(zhong)包括5’末端的(de)(de)(de)非(fei)編碼區、自身(shen)蛋白(bai)分解(jie)酶、衣殼蛋白(bai)、糖蛋白(bai)(E0、E1、E2)、非(fei)結構蛋白(bai)NS-1、和NS-2的(de)(de)(de)基因均已(yi)缺失(shi)。
2.3豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)基因組檢測(ce)(ce)已報(bao)道(dao)利用(yong)RT-PCR方(fang)法檢測(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)RNA有數種程序。瘟(wen)病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)屬特異的引物多選自基因組的5’端(duan)保守區.其最突出(chu)(chu)的優點(dian)是(shi)其產(chan)物能用(yong)來直(zhi)接(jie)測(ce)(ce)序,直(zhi)接(jie)進(jin)行病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)株(zhu)的分(fen)型。一(yi)(yi)般來說套式RT-PCR方(fang)法是(shi)檢測(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)更(geng)敏(min)感的方(fang)法,但其缺點(dian)是(shi)比較費時.不適(shi)用(yong)于大量(liang)(liang)樣(yang)品的檢測(ce)(ce)。McGoldrick等報(bao)道(dao)了(le)(le)一(yi)(yi)種檢測(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)的單管熒光(guang)RT-PCR方(fang)法。此方(fang)法可檢測(ce)(ce)出(chu)(chu)仔豬(zhu)血(xue)樣(yang)中(zhong)感染(ran)(ran)了(le)(le)中(zhong)等毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)力(li)或高等毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)力(li)的豬(zhu)瘟(wen)病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du),其敏(min)感性高于病毒(du)(du)(du)(du)(du)(du)(du)分(fen)離方(fang)法.并且簡化了(le)(le)試驗程序.減少(shao)了(le)(le)污(wu)染(ran)(ran)的風險.還可進(jin)行大量(liang)(liang)樣(yang)品的檢測(ce)(ce)。
2.4抗體(ti)(ti)(ti)檢測最常用的(de)(de)(de)檢測豬瘟病(bing)毒抗體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)方法(fa)(fa)多以病(bing)毒中和試(shi)驗為(wei)基礎。目(mu)前已建立數個(ge)特異的(de)(de)(de)檢測血清(qing)抗體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)ELlSA方法(fa)(fa).包括(kuo)檢測針對粗(cu)蛋白(bai)、特異結構(gou)蛋白(bai)如E2、Erns以及(ji)非(fei)結構(gou)蛋白(bai)NS3抗體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)方法(fa)(fa)。目(mu)前使用最廣泛的(de)(de)(de)是CSFVE2ELISA,其敏(min)感性與VNT相(xiang)比為(wei)90%~99%.特異性為(wei)99%。Leforban等建立了一種(zhong)ELISA方法(fa)(fa),能夠(gou)區(qu)分BVDV、BDV以及(ji)CSFV抗體(ti)(ti)(ti)。這個(ge)方法(fa)(fa)對于BVDV/BDV高(gao)流行地(di)區(qu)(如荷(he)蘭)csF的(de)(de)(de)檢測非(fei)常有意義。ELISA特異性與敏(min)感性的(de)(de)(de)提高(gao)是目(mu)前面臨的(de)(de)(de)最大(da)的(de)(de)(de)挑(tiao)戰。
當前(qian),豬(zhu)瘟(wen)仍是世(shi)界養豬(zhu)業的一(yi)大威脅(xie).1997-1999年期間在(zai)德國(guo)(guo)(guo)、荷蘭、西班(ban)牙和(he)意大利等國(guo)(guo)(guo)都曾多次(ci)暴發了(le)(le)豬(zhu)瘟(wen),在(zai)中(zhong)國(guo)(guo)(guo)CSFV的持續(xu)性(xing)感染和(he)疫苗(miao)保(bao)護效力下降的現象也(ye)比較普遍,這不僅給(gei)養豬(zhu)業造成(cheng)了(le)(le)嚴重的經濟(ji)損失,而且(qie)也(ye)給(gei)豬(zhu)瘟(wen)防治(zhi)政策的制定帶來了(le)(le)一(yi)定的困難。不過,相信隨著CSFV分子生物學和(he)檢測方法研究的進(jin)一(yi)步深(shen)入,這些問題(ti)都會得到最終解決。