一、培養基的制備常見問題及原因分析

培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的(de)(de)配制(zhi)(zhi)是微生物實驗人員的(de)(de)基本(ben)技能(neng)(neng)之(zhi)一，適宜的(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基制(zhi)(zhi)備方法、選擇正確的(de)(de)滅菌方式、貯藏條件(jian)和質(zhi)量控制(zhi)(zhi)試驗是提供優質(zhi)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的(de)(de)保證，在制(zhi)(zhi)備培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的(de)(de)過程(cheng)中，可能(neng)(neng)會遇(yu)到以下幾種(zhong)問題：

1、培養基不能凝固

（1）制備(bei)過(guo)程中(zhong)過(guo)度加(jia)熱。

（2）低pH造(zao)成培(pei)養基酸解。

（3）稱量不正確瓊(qiong)脂未完全溶解。

（4）培養(yang)基(ji)成分(fen)未(wei)充分(fen)混勻(yun)。

2、pH不正確

（1）制備過程中過度加熱。

（2）水質不佳。

（3）外部化學物質污染。

（4）測(ce)定是(shi)溫度不正確。

（5）pH計為正(zheng)確校準(zhun)。

（6）脫水(shui)培養基質量差。

3、顏色異常

（1）制備過(guo)程過(guo)度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）外來污染。

（5）脫水培養基質量差。

4、產生沉淀

（1）制備過(guo)程過(guo)度加熱(re)。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）原料中的雜質(zhi)。

（5）脫(tuo)水培養基質量差。

5、培養基出現抑制/低生長率

（1）制備過程過度加熱(re)。

（2）水質不佳。

（3）脫水培養(yang)基質量(liang)差。

（4）使(shi)用成分不(bu)正確(que)，添加劑用量不(bu)正確(que)。

（5）容器或水中的有毒殘(can)留物。

6、選擇性差

（1）制備過(guo)程(cheng)過(guo)度(du)加熱(re)。

（2）脫水培養基(ji)質(zhi)量差。

（3）配方(fang)使用不對。

（4）添加(jia)成分(fen)不正確，例如添加(jia)成分(fen)是培養基(ji)過(guo)熱、添加(jia)濃度(du)錯誤等。

7、污染

（1）無菌操作(zuo)存在問題。

（2）添加劑污染。

（3）不適當滅菌

二、制備培養基如何減少失敗率

制(zhi)備(bei)(bei)培養基的時(shi)候(hou)，因(yin)為(wei)操作不當可(ke)能會出(chu)現各種問題，導致制(zhi)備(bei)(bei)失敗(bai)(bai)，為(wei)了(le)減少失敗(bai)(bai)率，制(zhi)備(bei)(bei)培養基時(shi)要注意：

1、選擇合適的培養基配方

同一種培養基的配方(fang)在不同著作(zuo)中常會有(you)某些差別。因此，除所(suo)用(yong)的是標(biao)準(zhun)方(fang)法，應(ying)嚴格按其規定進行配制外，一般均(jun)應(ying)盡量收(shou)集有(you)關資料(liao)，加(jia)以比較核對(dui)，再依據(ju)自己的使用(yong)目(mu)的加(jia)以選(xuan)用(yong)，記錄其來源。

2、培養基成分的稱取要精確

培養(yang)基的(de)各種成(cheng)(cheng)分必須精確稱(cheng)取(qu)(qu)并要(yao)注意防止(zhi)錯亂，最好一(yi)次(ci)完(wan)成(cheng)(cheng)，不(bu)要(yao)中斷(duan)。可將配方(fang)(fang)置(zhi)于傍側，每(mei)稱(cheng)完(wan)一(yi)種成(cheng)(cheng)分即(ji)在配方(fang)(fang)上做出(chu)記號(hao)，并將所需稱(cheng)取(qu)(qu)的(de)藥品一(yi)次(ci)取(qu)(qu)齊，置(zhi)于左(zuo)側，每(mei)種稱(cheng)取(qu)(qu)完(wan)畢(bi)后，即(ji)移放于右側。完(wan)全稱(cheng)取(qu)(qu)完(wan)畢(bi)后，還(huan)應進行一(yi)次(ci)檢查。

3、培養基各成分的混合和溶化要注意

培(pei)養(yang)基所用(yong)(yong)化(hua)(hua)學藥品(pin)均(jun)應是(shi)化(hua)(hua)學純的。使(shi)用(yong)(yong)的蒸煮鍋(guo)(guo)(guo)不(bu)得為銅鍋(guo)(guo)(guo)或(huo)鐵鍋(guo)(guo)(guo)，以防有(you)微量銅或(huo)鐵混入(ru)培(pei)養(yang)基中(zhong)(zhong)，使(shi)細(xi)菌不(bu)易生長。最(zui)好使(shi)用(yong)(yong)不(bu)銹鋼鍋(guo)(guo)(guo)加熱(re)溶(rong)化(hua)(hua)，也可放入(ru)大燒杯或(huo)大燒瓶中(zhong)(zhong)置高壓(ya)蒸汽(qi)滅(mie)菌器或(huo)流動蒸汽(qi)消(xiao)毒器中(zhong)(zhong)蒸煮溶(rong)化(hua)(hua)。在鍋(guo)(guo)(guo)中(zhong)(zhong)溶(rong)化(hua)(hua)時、可先用(yong)(yong)溫水加熱(re)并隨時擾動，以防焦化(hua)(hua)、如(ru)發現(xian)(xian)有(you)焦化(hua)(hua)現(xian)(xian)象、該培(pei)養(yang)基即不(bu)能使(shi)用(yong)(yong)，應重新(xin)制備。待大部分(fen)固體成分(fen)溶(rong)化(hua)(hua)后，再(zai)用(yong)(yong)較(jiao)小火(huo)力使(shi)所有(you)成分(fen)完全溶(rong)化(hua)(hua)。

4、調整好pH

培養(yang)(yang)基(ji)各成分(fen)完(wan)全溶(rong)解后，應(ying)(ying)進行pH的(de)(de)初步(bu)調(diao)正(zheng)，因(yin)培養(yang)(yang)基(ji)在加熱消毒過程中(zhong)、pH會有所變化，例如，牛(niu)肉(rou)浸液(ye)約(yue)可降低pH0.2。而腸(chang)浸液(ye)pH卻會有顯(xian)著(zhu)的(de)(de)升(sheng)高。因(yin)此，對(dui)這個步(bu)驟，操作者應(ying)(ying)隨時注意(yi)探索(suo)經(jing)驗(yan)、以期(qi)能掌握培養(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)最終pH，保證(zheng)培養(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)質(zhi)量。pH調(diao)正(zheng)后，還應(ying)(ying)將培養(yang)(yang)基(ji)煮沸數(shu)分(fen)鐘(zhong)，以利培養(yang)(yang)基(ji)沉淀(dian)物(wu)的(de)(de)析出。