一、培養基的制備常見問題及原因分析

培(pei)(pei)養基(ji)的(de)配制(zhi)(zhi)是微(wei)生物實驗人(ren)員的(de)基(ji)本(ben)技能之一，適宜的(de)培(pei)(pei)養基(ji)制(zhi)(zhi)備(bei)方法、選擇正確的(de)滅菌方式、貯藏條件(jian)和質量(liang)控制(zhi)(zhi)試(shi)驗是提供優(you)質培(pei)(pei)養基(ji)的(de)保(bao)證，在(zai)制(zhi)(zhi)備(bei)培(pei)(pei)養基(ji)的(de)過程(cheng)中，可(ke)能會遇到以下幾種問題：

1、培養基不能凝固

（1）制備過程中過度加熱。

（2）低pH造成培養基酸(suan)解。

（3）稱量不正確(que)瓊脂未完(wan)全(quan)溶解(jie)。

（4）培(pei)養基成分(fen)未(wei)充分(fen)混勻。

2、pH不正確

（1）制備過程中過度加(jia)熱。

（2）水質不佳。

（3）外部化學物質污染。

（4）測定是(shi)溫(wen)度不正(zheng)確。

（5）pH計為正(zheng)確校(xiao)準(zhun)。

（6）脫(tuo)水培養基質(zhi)量差。

3、顏色異常

（1）制備過(guo)程過(guo)度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）外來污染。

（5）脫水(shui)培(pei)養基質量差(cha)。

4、產生沉淀

（1）制備(bei)過程過度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）原料(liao)中的(de)雜質。

（5）脫水培養基質量差(cha)。

5、培養基出現抑制/低生長率

（1）制備過(guo)程過(guo)度加熱。

（2）水質不佳。

（3）脫水培養基質(zhi)量差。

（4）使用(yong)成(cheng)分(fen)不(bu)正確，添加劑用(yong)量不(bu)正確。

（5）容器或水中的有毒(du)殘留物。

6、選擇性差

（1）制備過程過度加熱。

（2）脫水培養(yang)基(ji)質量差。

（3）配(pei)方使用不對(dui)。

（4）添加成(cheng)分(fen)不正確，例如添加成(cheng)分(fen)是培養基過熱、添加濃度錯誤(wu)等。

7、污染

（1）無(wu)菌操作存在(zai)問(wen)題。

（2）添加劑污染。

（3）不適當滅菌

二、制備培養基如何減少失敗率

制(zhi)備(bei)培養基(ji)的時候，因(yin)為操作(zuo)不當(dang)可能會出現各種問題(ti)，導致制(zhi)備(bei)失敗，為了減少(shao)失敗率，制(zhi)備(bei)培養基(ji)時要注(zhu)意：

1、選擇合適的培養基配方

同(tong)一種(zhong)培養基(ji)的配方(fang)在不同(tong)著作中常會有某些(xie)差別(bie)。因(yin)此，除所用(yong)(yong)的是標準方(fang)法(fa)，應嚴格按其規(gui)定進(jin)行配制(zhi)外(wai)，一般均應盡(jin)量(liang)收集有關資(zi)料，加以(yi)比較核對，再依據自己的使用(yong)(yong)目的加以(yi)選用(yong)(yong)，記錄(lu)其來源。

2、培養基成分的稱取要精確

培養基的各種成(cheng)(cheng)分必須精確稱取(qu)(qu)并(bing)要注意防止錯亂，最好一次完成(cheng)(cheng)，不要中斷(duan)。可將配方(fang)置于傍側，每稱完一種成(cheng)(cheng)分即在配方(fang)上做出記號，并(bing)將所(suo)需稱取(qu)(qu)的藥(yao)品一次取(qu)(qu)齊，置于左側，每種稱取(qu)(qu)完畢(bi)(bi)后，即移(yi)放于右側。完全(quan)稱取(qu)(qu)完畢(bi)(bi)后，還應進行一次檢查。

3、培養基各成分的混合和溶化要注意

培養基(ji)所(suo)(suo)用(yong)化(hua)(hua)學藥品均應是化(hua)(hua)學純的。使(shi)用(yong)的蒸(zheng)煮鍋(guo)不得為銅鍋(guo)或鐵鍋(guo)，以防(fang)有微(wei)量銅或鐵混入培養基(ji)中，使(shi)細菌不易生長。最好使(shi)用(yong)不銹鋼鍋(guo)加熱(re)溶(rong)化(hua)(hua)，也可放入大(da)燒杯或大(da)燒瓶中置高壓蒸(zheng)汽滅菌器或流動蒸(zheng)汽消毒器中蒸(zheng)煮溶(rong)化(hua)(hua)。在鍋(guo)中溶(rong)化(hua)(hua)時(shi)(shi)、可先(xian)用(yong)溫水(shui)加熱(re)并隨時(shi)(shi)擾動，以防(fang)焦(jiao)化(hua)(hua)、如發(fa)現有焦(jiao)化(hua)(hua)現象、該培養基(ji)即(ji)不能使(shi)用(yong)，應重新制備。待大(da)部分(fen)固體成(cheng)分(fen)溶(rong)化(hua)(hua)后，再用(yong)較小火力(li)使(shi)所(suo)(suo)有成(cheng)分(fen)完全溶(rong)化(hua)(hua)。

4、調整好pH

培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)各成分完(wan)全溶解(jie)后，應進行(xing)pH的(de)初(chu)步(bu)調正，因培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)在加熱(re)消毒過程中、pH會(hui)有所變化，例如，牛肉(rou)浸液(ye)約(yue)可降低(di)pH0.2。而腸(chang)浸液(ye)pH卻(que)會(hui)有顯著的(de)升高。因此，對這個(ge)步(bu)驟，操作者應隨時注意探(tan)索經驗、以期能掌握培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)的(de)最終pH，保證培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)的(de)質量。pH調正后，還(huan)應將(jiang)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)煮沸數(shu)分鐘，以利培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)沉(chen)淀物的(de)析出。