一、培養基配制方法

培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般是根據配方配制而成的，配方沒有特殊要求的話，一般培養基的配制方法(fa)步(bu)驟如(ru)下：

1、配料

配(pei)方(fang)換(huan)算(suan)→在容器中加(jia)入(ru)少量水(shui)（蒸餾水(shui)，自然水(shui)）→按照(zhao)配(pei)方(fang)稱取各種藥(yao)品（依(yi)次加(jia)入(ru)）→加(jia)足所需水(shui)量（一藥(yao)一勺(shao)，取藥(yao)后立即蓋(gai)上瓶蓋(gai)）。

2、溶解

淀(dian)粉溶(rong)解：少量冷水調成(cheng)糊(hu)狀。

加熱溶解，特別(bie)是加有瓊脂的培(pei)養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且(qie)需要邊(bian)加熱邊(bian)攪拌以防止(zhi)燒焦(jiao)。

3、調PH

用1N的(de)鹽酸或1N的(de) NaOH把培養基(ji)調節到所要求(qiu)的(de)值。

4、過濾

濾紙或棉花(hua)進行過濾。（有時可(ke)以(yi)省去）

5、分裝

一般培養基(ji)放在(zai)三角瓶或試(shi)管中滅菌使用。

（1）三角瓶

若作靜(jing)置培(pei)(pei)養(yang)，則(ze)100ml培(pei)(pei)養(yang)基/250ml的三角瓶(ping)(ping)，最多不能超(chao)過(guo)150ml培(pei)(pei)養(yang)基/250ml的三角瓶(ping)(ping)，否則(ze)滅(mie)菌時(shi)培(pei)(pei)養(yang)基沸騰容(rong)易污染棉塞，造成(cheng)染菌；若作搖瓶(ping)(ping)培(pei)(pei)養(yang)，則(ze)15-20ml培(pei)(pei)養(yang)基/250ml的三角瓶(ping)(ping)，保證通氣良好(hao)。

（2）試管分裝

液(ye)體培養基(ji)一般裝(zhuang)(zhuang)4-5ml，約試管的1/4高度(du)；固(gu)體斜面(mian)培養基(ji)一般裝(zhuang)(zhuang)3-4ml，約試管的1/5高度(du)。

6、包扎

分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮(pi)紙將(jiang)棉塞包裹好，防止滅菌(jun)時水份進入把(ba)棉塞弄濕。

7、滅菌

按配方(fang)上要求的(de)溫(wen)度、壓(ya)力進行(xing)高壓(ya)蒸汽(qi)滅(mie)菌。如果滅(mie)菌的(de)溫(wen)度太高，營養成(cheng)分會(hui)被破壞，培養基(ji)中的(de)糖、氨基(ji)酸(suan)會(hui)使培養基(ji)的(de)顏色(se)變(bian)深。

8、擺斜面

滅(mie)菌(jun)后需要(yao)擺斜(xie)面的試管(guan)要(yao)趁熱斜(xie)著擺放，使其凝固(gu)成為一個斜(xie)面，約(yue)占試管(guan)長(chang)度的1/2。

9、貯存

培養基(ji)在30℃下放置一天，無污(wu)染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存(cun)放于2-8℃冰箱中備(bei)用。

二、培養基配制注意事項

1、分裝(zhuang)好的(de)培養基應當(dang)天進(jin)行(xing)滅菌(jun)處理(li)（2小時內(nei)滅菌(jun)最(zui)佳），分裝(zhuang)的(de)量不宜(yi)超過容器(qi)的(de)2/3以(yi)免滅菌(jun)時外溢。

2、實驗室(shi)采(cai)(cai)用(yong)濕(shi)熱滅(mie)(mie)(mie)菌對培養基(ji)(ji)進行滅(mie)(mie)(mie)菌處理(li)，按照培養基(ji)(ji)使用(yong)說(shuo)明采(cai)(cai)用(yong)合(he)適(shi)的滅(mie)(mie)(mie)菌溫度和時間。尤其含糖量(liang)(liang)較高(gao)(gao)的培養基(ji)(ji)溫度不應太(tai)高(gao)(gao)，過高(gao)(gao)會導致(zhi)糖分(fen)焦化，影響(xiang)質量(liang)(liang)。

3、每次制(zhi)備培養基均應(ying)有配(pei)制(zhi)記錄(lu)，記錄(lu)應(ying)復(fu)制(zhi)一份，原記錄(lu)保存備查，復(fu)制(zhi)記錄(lu)隨制(zhi)好的培養基一同(tong)存放、以防(fang)發生(sheng)混亂。

4、培(pei)(pei)養(yang)(yang)基應存放于(yu)冷暗處，最好放于(yu)普通冰(bing)箱(xiang)內。放置時間不宜超過(guo)一周，傾注的平板培(pei)(pei)養(yang)(yang)基不宜超過(guo)3天。每批(pi)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基均必須(xu)附(fu)有該批(pi)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基制備(bei)記錄副(fu)頁或(huo)明顯標簽。

三、培養基的配制原則有哪些

培養基的配制除了要(yao)注(zhu)意(yi)(yi)正確的方法以及一(yi)些注(zhu)意(yi)(yi)事(shi)項外，還要(yao)注(zhu)意(yi)(yi)遵(zun)循以下幾(ji)個(ge)原則：

1、選擇適宜的營養物質

總(zong)體而言(yan)，所(suo)有微(wei)生物(wu)生長(chang)(chang)繁殖均需(xu)要培養(yang)基含有碳源(yuan)、氮(dan)源(yuan)、無(wu)機鹽、生長(chang)(chang)因(yin)子、水(shui)及能(neng)源(yuan)，但由于微(wei)生物(wu)營(ying)養(yang)類型復雜，不同微(wei)生物(wu)對(dui)營(ying)養(yang)物(wu)質的需(xu)求(qiu)是不一樣的，因(yin)此首先(xian)要根據不同微(wei)生物(wu)的營(ying)養(yang)需(xu)求(qiu)配制(zhi)針(zhen)對(dui)性強(qiang)的培養(yang)基。

就微生(sheng)(sheng)物主要(yao)類(lei)型而言，有細菌(jun)、放線菌(jun)、酵(jiao)(jiao)母菌(jun)、霉菌(jun)、原(yuan)生(sheng)(sheng)動(dong)物、藻(zao)類(lei)及病(bing)毒之分，培(pei)(pei)養它(ta)們所需的(de)培(pei)(pei)養基(ji)各不相同。在實驗室(shi)中(zhong)常用牛肉(rou)膏蛋白胨(dong)培(pei)(pei)養基(ji)（或簡稱(cheng)普通肉(rou)湯培(pei)(pei)養基(ji)）培(pei)(pei)養細菌(jun)，用高氏I號合成(cheng)培(pei)(pei)養基(ji)培(pei)(pei)養放線菌(jun)，培(pei)(pei)養酵(jiao)(jiao)母菌(jun)一般用麥芽汁(zhi)培(pei)(pei)養基(ji)，培(pei)(pei)養霉菌(jun)則一般用查氏合成(cheng)培(pei)(pei)養基(ji)。

2、營養物質濃度及配比合適

培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)中營(ying)養(yang)物(wu)質濃度(du)合(he)適時微(wei)(wei)生(sheng)物(wu)才能(neng)生(sheng)長(chang)良(liang)好，營(ying)養(yang)物(wu)質濃度(du)過低時不(bu)能(neng)滿足微(wei)(wei)生(sheng)物(wu)正常生(sheng)長(chang)所(suo)需，濃度(du)過高時則可能(neng)對微(wei)(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)起抑(yi)制作用。另(ling)外，培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)中各營(ying)養(yang)物(wu)質之間的濃度(du)配比也(ye)(ye)直接影響(xiang)微(wei)(wei)生(sheng)物(wu)的生(sheng)長(chang)繁殖和(he)（或）代謝產物(wu)的形成和(he)積累，其中碳(tan)氮(dan)比（C/N）的影響(xiang)較大。嚴(yan)格地講，碳(tan)氮(dan)比指(zhi)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)中碳(tan)元(yuan)(yuan)素與氮(dan)元(yuan)(yuan)素的物(wu)質的量比值，有(you)時也(ye)(ye)指(zhi)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)中還(huan)原糖與粗蛋白之比。

3、控制pH條件

培養(yang)基的(de)(de)(de)(de)(de)pH必(bi)須(xu)控(kong)制在一定(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)范圍內，以滿(man)足不(bu)(bu)同類型微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物的(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)繁(fan)殖(zhi)或產生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)代謝(xie)(xie)產物。各類微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)繁(fan)殖(zhi)或產生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)代謝(xie)(xie)產物的(de)(de)(de)(de)(de)最適(shi)pH條(tiao)件各不(bu)(bu)相同，一般來講，細(xi)菌與放線菌適(shi)于(yu)在pH7-7.5范圍內生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)。值得注意的(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)，在微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)繁(fan)殖(zhi)和代謝(xie)(xie)過(guo)程中(zhong)，由于(yu)營(ying)養(yang)物質(zhi)被分解利用和代謝(xie)(xie)產物的(de)(de)(de)(de)(de)形(xing)成與積(ji)累，會導致(zhi)培養(yang)基pH發生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)變化，若(ruo)不(bu)(bu)對培養(yang)基pH條(tiao)件進行控(kong)制，往往導致(zhi)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)速度(du)下降(jiang)或（和）代謝(xie)(xie)產物產量下降(jiang)。因此，為了維(wei)持培養(yang)基pH的(de)(de)(de)(de)(de)相對恒定(ding)，通常在培養(yang)基中(zhong)加入pH緩沖劑。

4、控制氧化還原電位

不同類型微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)生(sheng)(sheng)長(chang)對氧化還(huan)原電位（F）的要求不一樣(yang)，一般(ban)好(hao)氧性微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)在(zai)(zai)F值(zhi)(zhi)為+0.1V以上(shang)時可(ke)(ke)正常生(sheng)(sheng)長(chang)，一般(ban)以+0.3—+0.4V為宜，厭氧性微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)只能(neng)在(zai)(zai)F值(zhi)(zhi)低(di)于+0.1V條件(jian)下(xia)生(sheng)(sheng)長(chang)，兼性厭氧微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)在(zai)(zai)F值(zhi)(zhi)為+0.1V以上(shang)時進行好(hao)氧呼(hu)吸，在(zai)(zai)+0.1V以下(xia)時進行發酵。F值(zhi)(zhi)與氧分(fen)壓(ya)和(he)pH有(you)關(guan)，也(ye)受某些微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)代謝產(chan)物(wu)(wu)的影響。在(zai)(zai)pH相對穩定(ding)的條件(jian)下(xia)，可(ke)(ke)通過增(zeng)加(jia)(jia)通氣量(liang)（如(ru)振(zhen)蕩培(pei)養(yang)、攪拌）提(ti)高培(pei)養(yang)基的氧分(fen)壓(ya)，或加(jia)(jia)入氧化劑(ji)，從而增(zeng)加(jia)(jia)F值(zhi)(zhi)；在(zai)(zai)培(pei)養(yang)基中加(jia)(jia)入抗壞血酸、硫(liu)化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫(liu)蘇(su)糖(tang)醇(chun)等還(huan)原性物(wu)(wu)質可(ke)(ke)降低(di)F值(zhi)(zhi)。

5、原料來源的選擇

在(zai)配制(zhi)培養基(ji)時，應盡量利(li)(li)用(yong)(yong)(yong)廉價且易于獲得的(de)原料作(zuo)(zuo)為(wei)培養基(ji)成(cheng)分，特別是在(zai)發(fa)酵(jiao)工(gong)業中(zhong)(zhong)，培養基(ji)用(yong)(yong)(yong)量很大，利(li)(li)用(yong)(yong)(yong)低成(cheng)本的(de)原料更體現出其經濟價值。例如，在(zai)微生物單細胞(bao)蛋(dan)白的(de)工(gong)業生產過程中(zhong)(zhong)，常常利(li)(li)用(yong)(yong)(yong)糖(tang)(tang)蜜（制(zhi)糖(tang)(tang)工(gong)業中(zhong)(zhong)含(han)(han)有(you)蔗(zhe)糖(tang)(tang)的(de)廢(fei)(fei)液）、乳清（乳制(zhi)品(pin)工(gong)業中(zhong)(zhong)含(han)(han)有(you)乳糖(tang)(tang)的(de)廢(fei)(fei)液）、豆制(zhi)品(pin)工(gong)業廢(fei)(fei)液及黑(hei)廢(fei)(fei)液（造紙工(gong)業中(zhong)(zhong)含(han)(han)有(you)戊糖(tang)(tang)和己糖(tang)(tang)的(de)亞(ya)硫(liu)酸(suan)紙漿）等都可作(zuo)(zuo)為(wei)培養基(ji)的(de)原料。再(zai)如，工(gong)業上的(de)甲烷發(fa)酵(jiao)主(zhu)要利(li)(li)用(yong)(yong)(yong)廢(fei)(fei)水、廢(fei)(fei)渣作(zuo)(zuo)原料，而在(zai)我國農村，已推廣(guang)利(li)(li)用(yong)(yong)(yong)人畜糞便及禾(he)草(cao)為(wei)原料發(fa)酵(jiao)生產甲烷作(zuo)(zuo)為(wei)燃(ran)料。另外，大量的(de)農副產品(pin)或制(zhi)品(pin)，如鼓皮、米糠、玉米漿、酵(jiao)母浸膏、酒糟、豆餅(bing)、花生餅(bing)、蛋(dan)白胨等都是常用(yong)(yong)(yong)的(de)發(fa)酵(jiao)工(gong)業原料。

6、滅菌處理

要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養基用1.05kg/cm²，121.3℃條件下維持15-30min可達到滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)目的(de)(de)(de)(de)。在(zai)高壓蒸汽(qi)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)過程中，長時間高溫會使(shi)(shi)某些不耐熱物(wu)質遭到破壞，如使(shi)(shi)糖類物(wu)質形成氨(an)基(ji)(ji)糖、焦糖，因此(ci)含(han)糖培養(yang)基(ji)(ji)常在(zai)0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進行(xing)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)，某些對糖類要求(qiu)較高的(de)(de)(de)(de)培養(yang)基(ji)(ji)，可先將糖進行(xing)過濾除菌(jun)(jun)(jun)或間歇滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)，再與其他已滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)成分混合(he)(he)；長時間高溫還會引起磷酸(suan)鹽、碳酸(suan)鹽與某些陽離(li)子(zi)（特(te)別(bie)是鈣、鎂、鐵離(li)子(zi)）結合(he)(he)形成難溶(rong)性(xing)復(fu)合(he)(he)物(wu)而產生(sheng)(sheng)(sheng)沉(chen)淀(dian)，因此(ci)，在(zai)配制用于觀察和(he)定量測定微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)長狀況的(de)(de)(de)(de)合(he)(he)成培養(yang)基(ji)(ji)時，常需在(zai)培養(yang)基(ji)(ji)中加(jia)入少量螯合(he)(he)劑(ji)，避免培養(yang)基(ji)(ji)中產生(sheng)(sheng)(sheng)沉(chen)淀(dian)，常用的(de)(de)(de)(de)螯合(he)(he)劑(ji)為乙二(er)胺四乙酸(suan)（EDTA）。還可以(yi)將含(han)鈣、鎂、鐵等離(li)子(zi)的(de)(de)(de)(de)成分與磷酸(suan)鹽、碳酸(suan)鹽分別(bie)進行(xing)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)，然(ran)后(hou)再混合(he)(he)，避免形成沉(chen)淀(dian)；高壓蒸汽(qi)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)后(hou)，培養(yang)基(ji)(ji)pH會發生(sheng)(sheng)(sheng)改變(bian)（一(yi)般使(shi)(shi)pH降低），可根(gen)據所(suo)培養(yang)微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)(de)要求(qiu)，在(zai)培養(yang)基(ji)(ji)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)前后(hou)加(jia)以(yi)調(diao)整。

在配(pei)制培養基過程中(zhong)，泡沫(mo)的存(cun)在對滅(mie)菌(jun)處理極不利，因為泡沫(mo)中(zhong)的空氣形成隔熱層，使泡沫(mo)中(zhong)微生物(wu)難以(yi)被殺死。因而有時需要在培養基中(zhong)加入消(xiao)泡沫(mo)劑以(yi)減少泡沫(mo)的產生，或(huo)適當提高滅(mie)菌(jun)溫度。