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培養基配制方法和注意事項 培養基的配制原則有哪些

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摘要:培養基的配制方法應按照配方要求來,一般沒有特殊要求的話,配制方法分為配料、溶解、調pH、過濾、分裝、包扎、滅菌、擺斜面、貯存幾個步驟,配制過程中要注意分裝的量不宜超過容器的2/3、滅菌溫度和時間要控制好、做好滅菌溫度和時間等,配制培養基還要注意遵循選擇適宜的營養物質、營養物質濃度及配比合適、控制pH條件等原則。下面一起來了解一下培養基配制方法和注意事項以及培養基的配制原則有哪些吧。

一、培養基配制方法

培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料,一般是根據配方配制而成的,配方沒有特殊要求的話,一般培養基的配制(zhi)方法步驟如下(xia):

1、配料

配方換算→在容器中加入少量水(shui)(蒸餾水(shui),自然水(shui))→按照配方稱取(qu)各(ge)種(zhong)藥(yao)品(依次加入)→加足所需水(shui)量(一藥(yao)一勺(shao),取(qu)藥(yao)后立即蓋上瓶蓋)。

2、溶解

淀(dian)粉溶解:少量冷水調成(cheng)糊狀(zhuang)。

加(jia)熱(re)溶解(jie),特別(bie)是加(jia)有瓊(qiong)脂的培養基,一定要煮沸(fei),瓊(qiong)脂的熔解(jie)溫(wen)度(du)95-97℃ ,且需要邊(bian)加(jia)熱(re)邊(bian)攪拌以防止燒焦(jiao)。

3、調PH

用1N的(de)鹽(yan)酸(suan)或1N的(de) NaOH把培養基(ji)調節到所要求的(de)值。

4、過濾

濾紙或棉花進行過濾。(有時可(ke)以(yi)省去)

5、分裝

一般(ban)培養基放在三角瓶(ping)或試管中滅菌使用。

(1)三角瓶

若(ruo)作(zuo)靜置培(pei)養,則100ml培(pei)養基(ji)/250ml的(de)三角瓶(ping),最多不能超過150ml培(pei)養基(ji)/250ml的(de)三角瓶(ping),否則滅(mie)菌時培(pei)養基(ji)沸騰(teng)容(rong)易污染(ran)棉(mian)塞,造(zao)成(cheng)染(ran)菌;若(ruo)作(zuo)搖瓶(ping)培(pei)養,則15-20ml培(pei)養基(ji)/250ml的(de)三角瓶(ping),保證通氣(qi)良好。

(2)試管分裝

液體培養基一(yi)般裝4-5ml,約試(shi)管(guan)的1/4高度(du);固體斜面培養基一(yi)般裝3-4ml,約試(shi)管(guan)的1/5高度(du)。

6、包扎

分(fen)裝(zhuang)好后,塞(sai)上棉(mian)塞(sai),在用(yong)牛皮紙將棉(mian)塞(sai)包裹好,防(fang)止(zhi)滅菌時水(shui)份進入把棉(mian)塞(sai)弄(nong)濕。

7、滅菌

按配方(fang)上要(yao)求的溫度(du)、壓力(li)進行高壓蒸汽(qi)滅(mie)菌(jun)。如果滅(mie)菌(jun)的溫度(du)太高,營(ying)養(yang)成(cheng)分會被破(po)壞,培(pei)養(yang)基中的糖(tang)、氨(an)基酸會使培(pei)養(yang)基的顏色變深(shen)。

8、擺斜面

滅菌后需要擺斜面的(de)試(shi)管要趁熱斜著擺放,使(shi)其凝(ning)固成(cheng)為一個斜面,約占試(shi)管長(chang)度的(de)1/2。

9、貯存

培(pei)養(yang)基在30℃下放置(zhi)一(yi)天(tian),無污染的即可使用。一(yi)般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。

二、培養基配制注意事項

1、分裝(zhuang)好(hao)的培養(yang)基(ji)應當天進行滅菌處理(2小時內滅菌最佳),分裝(zhuang)的量不宜(yi)超過容器的2/3以(yi)免(mian)滅菌時外溢。

2、實驗室采用(yong)濕熱(re)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)對培養(yang)基(ji)進(jin)行滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)處理,按照培養(yang)基(ji)使用(yong)說明采用(yong)合(he)適的滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)溫度(du)和時(shi)間。尤其含糖(tang)量(liang)較高(gao)(gao)的培養(yang)基(ji)溫度(du)不應太高(gao)(gao),過高(gao)(gao)會(hui)導致糖(tang)分焦化,影響質量(liang)。

3、每次制(zhi)備培(pei)養基(ji)均(jun)應(ying)有配制(zhi)記(ji)(ji)(ji)錄,記(ji)(ji)(ji)錄應(ying)復(fu)制(zhi)一(yi)份,原記(ji)(ji)(ji)錄保(bao)存備查,復(fu)制(zhi)記(ji)(ji)(ji)錄隨制(zhi)好(hao)的培(pei)養基(ji)一(yi)同存放、以防發生混(hun)亂。

4、培(pei)養(yang)基應存放于冷(leng)暗處,最好(hao)放于普通冰(bing)箱(xiang)內(nei)。放置時(shi)間(jian)不(bu)宜(yi)超(chao)過一(yi)周,傾注的(de)平板培(pei)養(yang)基不(bu)宜(yi)超(chao)過3天。每批培(pei)養(yang)基均必須附(fu)有該批培(pei)養(yang)基制備記錄(lu)副頁(ye)或(huo)明顯標(biao)簽。

三、培養基的配制原則有哪些

培養(yang)基的配制除了(le)要注(zhu)意(yi)(yi)正確的方(fang)法以及一些注(zhu)意(yi)(yi)事項外(wai),還要注(zhu)意(yi)(yi)遵循(xun)以下幾個原則:

1、選擇適宜的營養物質

總體而(er)言,所有微(wei)生物(wu)生長繁殖均需(xu)要(yao)培養(yang)基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因(yin)子、水及能源,但由于微(wei)生物(wu)營(ying)養(yang)類型復雜,不同微(wei)生物(wu)對營(ying)養(yang)物(wu)質的(de)需(xu)求(qiu)(qiu)是不一(yi)樣(yang)的(de),因(yin)此首先要(yao)根據不同微(wei)生物(wu)的(de)營(ying)養(yang)需(xu)求(qiu)(qiu)配制針(zhen)對性強的(de)培養(yang)基。

就(jiu)微生(sheng)物(wu)主要類型而(er)言,有細菌(jun)、放線菌(jun)、酵母(mu)菌(jun)、霉菌(jun)、原(yuan)生(sheng)動物(wu)、藻類及病毒(du)之分,培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)它們所需的培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基各(ge)不相同。在實(shi)驗室中常用(yong)牛(niu)肉膏(gao)蛋白胨(dong)培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(或簡稱普通肉湯培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基)培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)細菌(jun),用(yong)高氏I號合(he)成培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)放線菌(jun),培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)酵母(mu)菌(jun)一般(ban)(ban)用(yong)麥(mai)芽汁培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基,培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)霉菌(jun)則一般(ban)(ban)用(yong)查氏合(he)成培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基。

2、營養物質濃度及配比合適

培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)營養(yang)物(wu)質(zhi)濃(nong)度(du)合適時微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)才能(neng)(neng)生(sheng)(sheng)長(chang)良好,營養(yang)物(wu)質(zhi)濃(nong)度(du)過低時不能(neng)(neng)滿足微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)正常生(sheng)(sheng)長(chang)所(suo)需(xu),濃(nong)度(du)過高(gao)時則可能(neng)(neng)對(dui)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)生(sheng)(sheng)長(chang)起抑(yi)制作用。另(ling)外,培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)各營養(yang)物(wu)質(zhi)之(zhi)間的(de)(de)濃(nong)度(du)配比(bi)也直接(jie)影(ying)響微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)的(de)(de)生(sheng)(sheng)長(chang)繁殖和(或)代(dai)謝(xie)產物(wu)的(de)(de)形成(cheng)和積累,其中(zhong)碳氮比(bi)(C/N)的(de)(de)影(ying)響較(jiao)大(da)。嚴格(ge)地講(jiang),碳氮比(bi)指(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)碳元素與(yu)氮元素的(de)(de)物(wu)質(zhi)的(de)(de)量(liang)比(bi)值(zhi),有時也指(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)還原糖與(yu)粗蛋白之(zhi)比(bi)。

3、控制pH條件

培養(yang)基(ji)的(de)(de)pH必須控制(zhi)在(zai)(zai)(zai)(zai)一定的(de)(de)范圍(wei)內(nei),以滿足不同(tong)類型微(wei)(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)的(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)繁(fan)(fan)殖或產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)代(dai)(dai)謝產(chan)(chan)物(wu)。各(ge)類微(wei)(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)繁(fan)(fan)殖或產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)代(dai)(dai)謝產(chan)(chan)物(wu)的(de)(de)最適pH條(tiao)件各(ge)不相同(tong),一般來講,細菌(jun)與放線菌(jun)適于在(zai)(zai)(zai)(zai)pH7-7.5范圍(wei)內(nei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang),酵母菌(jun)和霉(mei)菌(jun)通常在(zai)(zai)(zai)(zai)pH4.5-6范圍(wei)內(nei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)。值得注意的(de)(de)是,在(zai)(zai)(zai)(zai)微(wei)(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)繁(fan)(fan)殖和代(dai)(dai)謝過程中,由于營養(yang)物(wu)質被分解(jie)利用(yong)和代(dai)(dai)謝產(chan)(chan)物(wu)的(de)(de)形成與積累,會導致培養(yang)基(ji)pH發生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)變化(hua),若不對培養(yang)基(ji)pH條(tiao)件進行控制(zhi),往往導致微(wei)(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)速度下(xia)降或(和)代(dai)(dai)謝產(chan)(chan)物(wu)產(chan)(chan)量(liang)下(xia)降。因此(ci),為了維持培養(yang)基(ji)pH的(de)(de)相對恒(heng)定,通常在(zai)(zai)(zai)(zai)培養(yang)基(ji)中加入pH緩沖劑。

4、控制氧化還原電位

不同(tong)類(lei)型微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)生(sheng)(sheng)長對氧(yang)化還原電位(F)的(de)要求不一(yi)(yi)樣,一(yi)(yi)般好氧(yang)性(xing)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)在(zai)F值(zhi)為(wei)+0.1V以(yi)上時可(ke)正常生(sheng)(sheng)長,一(yi)(yi)般以(yi)+0.3—+0.4V為(wei)宜,厭(yan)(yan)氧(yang)性(xing)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)只能在(zai)F值(zhi)低于+0.1V條(tiao)件下生(sheng)(sheng)長,兼(jian)性(xing)厭(yan)(yan)氧(yang)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)在(zai)F值(zhi)為(wei)+0.1V以(yi)上時進行(xing)好氧(yang)呼吸,在(zai)+0.1V以(yi)下時進行(xing)發酵(jiao)。F值(zhi)與(yu)氧(yang)分壓和pH有關,也受某些(xie)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)代謝產(chan)物(wu)(wu)的(de)影響。在(zai)pH相對穩定的(de)條(tiao)件下,可(ke)通(tong)過增(zeng)加(jia)(jia)通(tong)氣量(如振蕩培(pei)(pei)養、攪拌(ban))提(ti)高(gao)培(pei)(pei)養基的(de)氧(yang)分壓,或加(jia)(jia)入氧(yang)化劑(ji),從(cong)而增(zeng)加(jia)(jia)F值(zhi);在(zai)培(pei)(pei)養基中加(jia)(jia)入抗壞(huai)血酸、硫(liu)(liu)化氫、半胱氨酸、谷(gu)胱甘肽、二硫(liu)(liu)蘇糖醇等(deng)還原性(xing)物(wu)(wu)質可(ke)降低F值(zhi)。

5、原料來源的選擇

在(zai)配制(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)時,應盡量(liang)利(li)用(yong)廉價(jia)且易于獲(huo)得的(de)(de)(de)原料(liao)作(zuo)(zuo)(zuo)為培(pei)養(yang)基(ji)成分,特別是在(zai)發(fa)酵(jiao)(jiao)工(gong)業(ye)中(zhong)(zhong),培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)量(liang)很大(da),利(li)用(yong)低(di)成本(ben)的(de)(de)(de)原料(liao)更體現出其經濟價(jia)值(zhi)。例如(ru)(ru),在(zai)微生(sheng)(sheng)物單細(xi)胞蛋白(bai)(bai)的(de)(de)(de)工(gong)業(ye)生(sheng)(sheng)產(chan)過程(cheng)中(zhong)(zhong),常常利(li)用(yong)糖(tang)蜜(制(zhi)糖(tang)工(gong)業(ye)中(zhong)(zhong)含有(you)蔗糖(tang)的(de)(de)(de)廢(fei)(fei)液(ye))、乳(ru)清(乳(ru)制(zhi)品(pin)工(gong)業(ye)中(zhong)(zhong)含有(you)乳(ru)糖(tang)的(de)(de)(de)廢(fei)(fei)液(ye))、豆制(zhi)品(pin)工(gong)業(ye)廢(fei)(fei)液(ye)及(ji)黑廢(fei)(fei)液(ye)(造紙工(gong)業(ye)中(zhong)(zhong)含有(you)戊(wu)糖(tang)和己糖(tang)的(de)(de)(de)亞硫酸紙漿)等(deng)都可作(zuo)(zuo)(zuo)為培(pei)養(yang)基(ji)的(de)(de)(de)原料(liao)。再如(ru)(ru),工(gong)業(ye)上的(de)(de)(de)甲烷發(fa)酵(jiao)(jiao)主要利(li)用(yong)廢(fei)(fei)水、廢(fei)(fei)渣作(zuo)(zuo)(zuo)原料(liao),而在(zai)我國農村,已推廣利(li)用(yong)人畜糞(fen)便及(ji)禾草為原料(liao)發(fa)酵(jiao)(jiao)生(sheng)(sheng)產(chan)甲烷作(zuo)(zuo)(zuo)為燃料(liao)。另外,大(da)量(liang)的(de)(de)(de)農副產(chan)品(pin)或制(zhi)品(pin),如(ru)(ru)鼓皮(pi)、米(mi)糠、玉米(mi)漿、酵(jiao)(jiao)母浸膏、酒糟(zao)、豆餅、花生(sheng)(sheng)餅、蛋白(bai)(bai)胨等(deng)都是常用(yong)的(de)(de)(de)發(fa)酵(jiao)(jiao)工(gong)業(ye)原料(liao)。

6、滅菌處理

要獲得微生物純培養,必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言,更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維(wei)持15-30min可達到滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)目的(de)(de)。在高(gao)壓(ya)蒸汽(qi)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)過程中(zhong),長時(shi)間(jian)高(gao)溫會(hui)使某(mou)些不耐熱物(wu)質(zhi)(zhi)遭到破壞(huai),如使糖(tang)類物(wu)質(zhi)(zhi)形(xing)成(cheng)氨基(ji)糖(tang)、焦糖(tang),因此含(han)糖(tang)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)常(chang)在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分鐘進行滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun),某(mou)些對糖(tang)類要(yao)求(qiu)較高(gao)的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji),可先(xian)將(jiang)糖(tang)進行過濾(lv)除菌(jun)(jun)(jun)(jun)或(huo)間(jian)歇滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun),再(zai)(zai)與其(qi)他已滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)成(cheng)分混合(he);長時(shi)間(jian)高(gao)溫還(huan)會(hui)引(yin)起磷酸(suan)鹽、碳酸(suan)鹽與某(mou)些陽離子(特別(bie)是鈣、鎂、鐵(tie)離子)結(jie)合(he)形(xing)成(cheng)難溶(rong)性(xing)復合(he)物(wu)而產生沉(chen)淀(dian),因此,在配制用(yong)(yong)于(yu)觀察和定(ding)量(liang)測(ce)定(ding)微生物(wu)生長狀況(kuang)的(de)(de)合(he)成(cheng)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)時(shi),常(chang)需在培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加入(ru)少(shao)量(liang)螯合(he)劑,避免培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)產生沉(chen)淀(dian),常(chang)用(yong)(yong)的(de)(de)螯合(he)劑為乙二胺(an)四(si)乙酸(suan)(EDTA)。還(huan)可以(yi)將(jiang)含(han)鈣、鎂、鐵(tie)等(deng)離子的(de)(de)成(cheng)分與磷酸(suan)鹽、碳酸(suan)鹽分別(bie)進行滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun),然(ran)后再(zai)(zai)混合(he),避免形(xing)成(cheng)沉(chen)淀(dian);高(gao)壓(ya)蒸汽(qi)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)后,培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)pH會(hui)發(fa)生改變(一般使pH降低),可根據(ju)所培(pei)(pei)(pei)養(yang)微生物(wu)的(de)(de)要(yao)求(qiu),在培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)前后加以(yi)調整。

在配制(zhi)培養基(ji)(ji)過(guo)程中,泡(pao)沫(mo)的(de)存在對滅(mie)(mie)菌處理(li)極不利,因為泡(pao)沫(mo)中的(de)空(kong)氣(qi)形成(cheng)隔(ge)熱層,使泡(pao)沫(mo)中微生(sheng)物難以被殺死(si)。因而有(you)時需要在培養基(ji)(ji)中加入消泡(pao)沫(mo)劑以減少(shao)泡(pao)沫(mo)的(de)產生(sheng),或適當提高(gao)滅(mie)(mie)菌溫度(du)。

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