一、膠原酶簡介

膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶按其存在的(de)(de)方式不同(tong)可分(fen)為人(ren)體(ti)內源(yuan)性(xing)膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶和藥用膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶兩種(zhong)。人(ren)體(ti)內源(yuan)性(xing)膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶是(shi)指人(ren)體(ti)內部本身所(suo)具(ju)有的(de)(de)膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶，如(ru)牙齦、觸膜(mo)等上(shang)皮組(zu)織和關(guan)節滑膜(mo)、椎間盤內都不同(tong)程度的(de)(de)存在著這種(zhong)膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶，它在體(ti)內膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)蛋白(bai)的(de)(de)分(fen)解過程中發(fa)揮(hui)著不可或缺的(de)(de)作用。藥用膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)酶是(shi)指利用生物制(zhi)藥的(de)(de)高科技手(shou)段從溶組(zu)織梭(suo)狀芽孢桿(gan)菌的(de)(de)發(fa)酵液中提取、純化并精制(zhi)而得的(de)(de)白(bai)色(se)或類白(bai)色(se)無菌凍干粉針生物制(zhi)劑。

膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)（collagenase）是從溶組(zu)織梭(suo)狀細胞(bao)(bao)(bao)芽(ya)孢桿菌提取制(zhi)備的(de)，主要水解結締組(zu)織中(zhong)膠原(yuan)蛋(dan)白(bai)成分。當(dang)擬(ni)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)的(de)組(zu)織較(jiao)硬，內含較(jiao)多結締組(zu)織或膠原(yuan)成分時(shi)，用(yong)胰蛋(dan)白(bai)酶(mei)(mei)(mei)解離(li)細胞(bao)(bao)(bao)的(de)效果較(jiao)差，這時(shi)可采(cai)用(yong)膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)解離(li)細胞(bao)(bao)(bao)法(fa)。 膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)僅對細胞(bao)(bao)(bao)間(jian)質有消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)作(zuo)用(yong)而對上(shang)皮(pi)(pi)細胞(bao)(bao)(bao)影響不大(da)。因此適于(yu)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)分離(li)纖維性(xing)組(zu)織、上(shang)皮(pi)(pi)及癌組(zu)織，可使上(shang)皮(pi)(pi)細胞(bao)(bao)(bao)與膠原(yuan)成分分離(li)而不受損害。常用(yong)劑量為(wei)最(zui)終濃度(du)200U/ml（約為(wei)1mg/mL）或0.03%~0.3%。膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)分為(wei)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型(xing)以及肝細胞(bao)(bao)(bao)專用(yong)膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)，要根據所要分離(li)消(xiao)(xiao)化(hua)(hua)的(de)組(zu)織類型(xing)選擇(ze)膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)類型(xing)。

1、膠原酶(mei)Ⅰ用(yong)于(yu)上皮(pi)、肺，脂肪和腎上腺組織細(xi)(xi)胞(bao)的分離。用(yong)于(yu)消化組織中連接部分使其(qi)成(cheng)為單個細(xi)(xi)胞(bao)，用(yong)于(yu)哺乳動細(xi)(xi)胞(bao)的分離。

2、膠原酶Ⅳ包含至(zhi)少7種(zhong)蛋白酶成(cheng)分，分子量從68-130KD不(bu)等。它能消化(hua)多(duo)種(zhong)組織。

3、膠(jiao)原酶(mei)(mei)Ⅴ包含至(zhi)少7種蛋白酶(mei)(mei)成(cheng)分(fen)，分(fen)子量從68-130KD不等。它可用(yong)于胰腺小(xiao)島組織的分(fen)離，將結締組織分(fen)離成(cheng)單個細胞。

4、膠原酶Ⅱ適用于肝臟，骨，甲狀(zhuang)腺(xian)，心臟和唾液腺(xian)組織。

二、如何配置膠原酶

膠原酶溶液(ye)同胰(yi)蛋(dan)白酶一樣配制、消毒滅菌(jun)和儲藏(zang)。

注意(yi)：因(yin)為(wei)Ⅰ型膠原酶(mei)分(fen)子顆粒比胰酶(mei)大，不容易(yi)過(guo)濾(lv)，因(yin)此可(ke)以用(yong)蔡式濾(lv)器過(guo)濾(lv)除(chu)菌。 　　鈣、鎂離子和血清成分(fen)不會影響(xiang)膠原酶(mei)的消化作用(yong)，因(yin)而(er)可(ke)用(yong)BSS（如D-hanks或者(zhe)PBS）或含血清的培養液配制(zhi)。

三、膠原酶的使用

1、將漂洗、修剪干(gan)凈的(de)組織剪成1~2mm左右小塊。

2、將組織塊放入離心管（三角(jiao)燒(shao)瓶）中加(jia)入30~50倍體積的膠原酶溶液，旋緊蓋子（密封燒(shao)瓶）。

3、將燒瓶放入37℃水(shui)浴或者37℃孵箱(xiang)內(nei)，每隔3min振搖一(yi)次，如(ru)能放在37℃的(de)(de)恒溫震(zhen)蕩(dang)(dang)水(shui)浴箱(xiang)中(zhong)則更好。消(xiao)(xiao)化(hua)時(shi)間與(yu)組織(zhi)(zhi)的(de)(de)類(lei)別很(hen)有關(guan)系，對(dui)于某些腫瘤組織(zhi)(zhi)或其他較致(zhi)密結(jie)締組織(zhi)(zhi)，消(xiao)(xiao)化(hua)時(shi)間4~48h，對(dui)于容易(yi)消(xiao)(xiao)化(hua)的(de)(de)組織(zhi)(zhi)可以(yi)(yi)采用(yong)37℃震(zhen)蕩(dang)(dang)消(xiao)(xiao)化(hua)15~45min，也可以(yi)(yi)根(gen)據具體情況而(er)定。如(ru)組織(zhi)(zhi)塊已分(fen)(fen)散而(er)失(shi)去塊的(de)(de)形狀，一(yi)經搖動即成(cheng)細(xi)胞(bao)(bao)團或單個細(xi)胞(bao)(bao)，可以(yi)(yi)認為(wei)已消(xiao)(xiao)化(hua)充分(fen)(fen)。上(shang)(shang)皮(pi)組織(zhi)(zhi)經膠原酶消(xiao)(xiao)化(hua)后(hou)，由于上(shang)(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)(bao)對(dui)此(ci)酶有耐(nai)受性，可能仍有一(yi)些細(xi)胞(bao)(bao)團未完全分(fen)(fen)散，但成(cheng)團的(de)(de)上(shang)(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)(bao)比分(fen)(fen)散的(de)(de)單個上(shang)(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)(bao)更易(yi)生(sheng)長，因此(ci)，如(ru)無特殊需(xu)要可以(yi)(yi)不必再進一(yi)步處理。

4、收集消(xiao)化液(ye)（有時含個別組(zu)織塊及沒有充分消(xiao)化的(de)組(zu)織碎屑則需用100目不(bu)銹鋼(gang)網過濾(lv)），離(li)心(xin)1000r/min，5min，去(qu)除上(shang)清，用Hanks液(ye)或者無血清培養(yang)液(ye)離(li)心(xin)漂洗1~2次(ci)，去(qu)除上(shang)清，加培養(yang)液(ye)制成細胞懸液(ye)，接種培養(yang)瓶(ping)。