一、免疫診斷原理有哪幾種
免(mian)(mian)疫(yi)(yi)診斷(duan)(duan)是(shi)應(ying)用免(mian)(mian)疫(yi)(yi)學的理論、技術和方(fang)法診斷(duan)(duan)各種疾病(bing)和測(ce)定免(mian)(mian)疫(yi)(yi)狀態(tai)的診斷(duan)(duan)方(fang)法,目前免(mian)(mian)疫(yi)(yi)診斷(duan)(duan)的平臺和方(fang)法有多種多樣(yang),但是(shi)都基于(yu)相(xiang)(xiang)同(tong)或相(xiang)(xiang)似的原(yuan)理,主要有五大基本(ben)原(yuan)理:
1、雙抗體夾心
(1)原(yuan)(yuan)理:雙抗體夾心(xin)法是檢測抗原(yuan)(yuan)最常用的(de)方(fang)法,雙抗體夾心(xin)法適(shi)用于(yu)測定(ding)擁(yong)有至少(shao)兩(liang)個表位的(de)大分(fen)子抗原(yuan)(yuan)。不適(shi)用于(yu)測定(ding)半抗原(yuan)(yuan)及小分(fen)子單價抗原(yuan)(yuan),不能形成兩(liang)位點(dian)夾心(xin)。
(2)應用場景(jing):絕大多(duo)數檢(jian)測蛋白都可以使用雙抗(kang)體夾心法(fa)。有(you)些抗(kang)體檢(jian)測項目,如總IgE檢(jian)測。
(3)注意事宜:在一步法,待測抗(kang)原與標(biao)記抗(kang)體一起加入(ru)反應(ying)中,當標(biao)本(ben)中受檢抗(kang)原的含量(liang)很高時(shi),過量(liang)抗(kang)原會分別和固相(xiang)包被抗(kang)體及標(biao)記抗(kang)體結合(he),不會形成“夾(jia)心復(fu)合(he)物”就出現(xian)(xian)鉤狀效應(ying),導致結果(guo)(guo)偏低(di)或者甚至可出現(xian)(xian)假陰性結果(guo)(guo)。
2、雙抗原夾心
(1)原(yuan)理:雙抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)夾心法(fa)(fa)的(de)反應(ying)模式與雙抗(kang)(kang)(kang)體(ti)夾心法(fa)(fa)類似。用特異性(xing)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)進行包被和標記(ji)。有研究表(biao)明,雙抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)夾心法(fa)(fa)檢測(ce)(ce)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)的(de)靈敏(min)度(du)和準確性(xing)要抗(kang)(kang)(kang)體(ti)檢測(ce)(ce)使(shi)用的(de)間(jian)接法(fa)(fa)(檢測(ce)(ce)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)更為常用的(de)一種方法(fa)(fa))。
(2)應用(yong)場(chang)景:理論上,檢(jian)(jian)(jian)測抗體的(de)項(xiang)目(mu)均可使用(yong),如乙肝表(biao)面蛋白(bai)抗體檢(jian)(jian)(jian)測。待檢(jian)(jian)(jian)抗體IgG的(de)兩(liang)個(ge)Fab需要(yao)分別同固相包被抗原(yuan)和標記抗原(yuan)同時結合。
(3)注(zhu)意事宜:抗原標(biao)記過程(cheng)可能導(dao)致蛋白構象變化,需要(yao)尋找最適合的標(biao)記物和標(biao)記方法。
3、間接法
(1)原理:間(jian)接法(fa)是檢測抗(kang)體常用(yong)(yong)的(de)方(fang)法(fa)。其原理為利(li)用(yong)(yong)標記的(de)抗(kang)抗(kang)體,俗稱(cheng)二抗(kang),來檢測與(yu)固(gu)相(xiang)包被抗(kang)原結合的(de)受檢抗(kang)體。本法(fa)主要(yao)用(yong)(yong)于對病(bing)原體抗(kang)體的(de)檢測而進行傳染病(bing)的(de)診(zhen)斷。
(2)應(ying)用(yong)場景(jing):所有的IgG抗體檢測都可以使(shi)用(yong)。如新冠血清IgG檢測。
(3)注(zhu)意事宜:本(ben)方法的優點是(shi)只要變換包被(bei)抗(kang)原的種類就可利(li)用(yong)同(tong)一標記抗(kang)抗(kang)體(ti)(二抗(kang))建立(li)檢測相應(ying)抗(kang)體(ti)的方法。
4、競爭法
(1)原理:當小分子抗(kang)原或半抗(kang)原因(yin)缺(que)乏可作(zuo)夾(jia)心法的(de)(de)(de)兩個表(biao)位供包(bao)被和檢測抗(kang)體同時識別結(jie)合(he),因(yin)此不能用(yong)雙抗(kang)體夾(jia)心法進行(xing)測定,可以(yi)采用(yong)競(jing)爭法模(mo)式。由于物(wu)質的(de)(de)(de)相互作(zuo)用(yong)或者結(jie)合(he)是相對動態平衡的(de)(de)(de)過程(cheng),一(yi)旦樣本(ben)中(zhong)存在待檢測物(wu),樣品(pin)中(zhong)的(de)(de)(de)待檢測物(wu)會同試劑中(zhong)的(de)(de)(de)標記物(wu)去競(jing)爭結(jie)合(he)包(bao)被物(wu)。這樣就會導(dao)致原來結(jie)合(he)在一(yi)起的(de)(de)(de)包(bao)被物(wu)和標記物(wu)分離,使原本(ben)飽(bao)滿(man)的(de)(de)(de)信(xin)號值進行(xing)降低(di)。信(xin)號降低(di)的(de)(de)(de)程(cheng)度同待檢測物(wu)的(de)(de)(de)濃度成正(zheng)相關。
(2)應用(yong)場(chang)景:小(xiao)分子抗原(yuan)或半抗原(yuan),如激素檢(jian)測(ce),雌二醇(chun),睪(gao)酮;甲狀(zhuang)腺功能檢(jian)測(ce),T4,T3等。
(3)注意事宜:競爭法中(zhong),有些待檢測物分子(zi)特(te)別小,很(hen)難制備或找(zhao)到適(shi)合(he)使(shi)用的(de)抗體,而(er)且生理條件下可(ke)(ke)以同(tong)其他(ta)蛋白結合(he),那(nei)么可(ke)(ke)以使(shi)用該分子(zi)的(de)結合(he)蛋白來(lai)代替抗體實現。如,25OH-Vd檢測,可(ke)(ke)使(shi)用25OH-Vd特(te)異性抗體,也可(ke)(ke)使(shi)用Vd結合(he)蛋白。
5、捕獲法(反向間接法)
(1)原理:捕獲包(bao)被法,又(you)稱為反向間(jian)接法,采用(yong)抗(kang)抗(kang)體(二抗(kang))包(bao)被,抗(kang)原進(jin)行標記的檢(jian)測(ce)方法。以目前常(chang)用(yong)的IgM測(ce)定為例,因血清中(zhong)針對某(mou)種抗(kang)原的特異性IgM和IgG同時(shi)存在(zai),則(ze)后者可干擾IgM的測(ce)定。因此先將(jiang)所有血清IgM(包(bao)括異性IgM和非特異性IgM)固(gu)定在(zai)固(gu)相上,在(zai)去除IgG后再測(ce)定特異性IgM。
(2)應用場景:IgM測定(ding)最為(wei)常(chang)見,特(te)定(ding)過(guo)敏原IgE檢測。
(3)注(zhu)意(yi)事宜:IgM型類(lei)風(feng)濕因子(zi)(zi)(RF)的干擾(rao),IgE型類(lei)風(feng)濕因子(zi)(zi)相對較(jiao)少(shao)。
二、免疫診斷有什么特點
1、特異性(xing)(xing)強,不出現(xian)交叉反應,不出現(xian)假陽(yang)性(xing)(xing),可保(bao)證診(zhen)斷的準(zhun)確性(xing)(xing)。
2、靈(ling)敏(min)度高,能(neng)測出(chu)微(wei)(wei)量反應(ying)物質和輕微(wei)(wei)的異常變化,有利于早期診斷和排除可疑病(bing)例。
3、簡便、快速、安全(quan)。