美洲(zhou)大(da)赤魷(DosidicusGigas)在食品加工過程(cheng)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)軟(ruan)骨(gu)廢棄物為(wei)(wei)原(yuan)料(liao),建立(li)包括粉(fen)碎、脫水脫脂、酶解、除蛋白(bai)(bai)、醇沉(chen)、離(li)子(zi)交換、脫鹽等(deng)操作流(liu)程(cheng)的(de)(de)(de)(de)CS制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)方法,制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)得到新(xin)型(xing)CS。最(zui)終產品的(de)(de)(de)(de)產率達(da)到16±2%。用(yong)商品化(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)硫(liu)酸軟(ruan)骨(gu)素(su)ABC酶、硫(liu)酸皮膚素(su)酶、透(tou)明質酸酶(來自于StreptomycesHyalurolyticus)、以及實(shi)驗室自有產權(quan)的(de)(de)(de)(de)rHCLase降(jiang)解所(suo)得多糖(tang)(tang)(tang),根據酶的(de)(de)(de)(de)底物專一性(xing),確認所(suo)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)多糖(tang)(tang)(tang)為(wei)(wei)CS；通過咔唑反應檢(jian)測(ce)樣(yang)品中(zhong)新(xin)型(xing)CS含(han)量(liang)(liang),BCA蛋白(bai)(bai)定(ding)量(liang)(liang)法檢(jian)測(ce)樣(yang)品中(zhong)蛋白(bai)(bai)含(han)量(liang)(liang)。結(jie)(jie)果(guo)(guo)提示：樣(yang)品中(zhong)新(xin)型(xing)CS含(han)量(liang)(liang)達(da)到97%以上,蛋白(bai)(bai)含(han)量(liang)(liang)低于2%。2.新(xin)型(xing)CS多糖(tang)(tang)(tang)結(jie)(jie)構(gou)的(de)(de)(de)(de)初(chu)步(bu)分(fen)(fen)析：參照葡聚糖(tang)(tang)(tang)分(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)標準(zhun)物,經凝(ning)膠過濾HPLC分(fen)(fen)析,確定(ding)所(suo)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)NER-CS多糖(tang)(tang)(tang)平(ping)均分(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)約為(wei)(wei)623.2 kDa。再(zai)通過硫(liu)酸軟(ruan)骨(gu)素(su)ABC酶完全降(jiang)解,結(jie)(jie)合HPLC分(fen)(fen)析二糖(tang)(tang)(tang)組成,發現(xian)NER-CS主要含(han)有GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中(zhong)E-unit含(han)量(liang)(liang)最(zui)高(gao)可達(da)44.5%,同時(shi)GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)量(liang)(liang)分(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)酸化(hua)(hua)度(du)為(wei)(wei)1.37。是一種新(xin)型(xing)高(gao)硫(liu)酸化(hua)(hua)CS。3NER-CS生物活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)(de)初(chu)步(bu)分(fen)(fen)析：1)用(yong)Aglyco試(shi)劑盒檢(jian)測(ce)NER-CS的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)凝(ning)血活(huo)性(xing),結(jie)(jie)果(guo)(guo)顯(xian)示：NER-CS抗(kang)(kang)(kang)(kang)FⅡa和(he)抗(kang)(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)性(xing)分(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)0.9±0.2U/mg,是陽性(xing)對(dui)照肝素(su)抗(kang)(kang)(kang)(kang)FⅡa活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)(de)10%左右,抗(kang)(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)(de)4%左右；2)利用(yong)乳腺癌4T1細胞(bao)試(shi)驗轉移模(mo)型(xing),分(fen)(fen)析NER-CS在小鼠(shu)體內(nei)抗(kang)(kang)(kang)(kang)腫瘤(liu)轉移活(huo)性(xing),結(jie)(jie)果(guo)(guo)顯(xian)示：50、100和(he)200μgNER-CS的(de)(de)(de)(de)抑瘤(liu)率分(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同時(shi)陽性(xing)對(dui)照100μg肝素(su)的(de)(de)(de)(de)抑瘤(liu)率為(wei)(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)親和(he)素(su)修飾的(de)(de)(de)(de)CM5芯片固定(ding)生物素(su)化(hua)(hua)NER-CS,分(fen)(fen)析NER-CS與(yu)五種生長因(yin)子(zi)、三種選擇素(su)的(de)(de)(de)(de)相互作用(yong)活(huo)性(xing),結(jie)(jie)果(guo)(guo)顯(xian)示NER-CS與(yu)生長因(yin)子(zi)HGF、bFGF相互作用(yong)活(huo)性(xing)較高(gao),親和(he)力常數分(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡(gua)糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)及其抗(kang)(kang)(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing)分(fen)(fen)析。