美洲大赤魷(DosidicusGigas)在(zai)(zai)食品加工過(guo)程(cheng)中的(de)(de)軟骨廢棄(qi)物(wu)(wu)為(wei)原料,建立包(bao)括粉(fen)碎、脫水脫脂、酶(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)、除蛋(dan)(dan)白(bai)、醇沉(chen)、離子(zi)(zi)(zi)交換、脫鹽等操作(zuo)流程(cheng)的(de)(de)CS制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)(bei)方法,制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)(bei)得(de)到新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS。最終產品的(de)(de)產率(lv)達到16±2%。用(yong)商品化(hua)的(de)(de)硫酸(suan)(suan)(suan)軟骨素(su)(su)ABC酶(mei)(mei)(mei)、硫酸(suan)(suan)(suan)皮(pi)膚素(su)(su)酶(mei)(mei)(mei)、透明(ming)質酸(suan)(suan)(suan)酶(mei)(mei)(mei)(來自于(yu)StreptomycesHyalurolyticus)、以及實(shi)驗室自有產權的(de)(de)rHCLase降解(jie)(jie)所得(de)多糖(tang),根據酶(mei)(mei)(mei)的(de)(de)底物(wu)(wu)專(zhuan)一(yi)性(xing)(xing)(xing)(xing),確認所制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)(bei)的(de)(de)多糖(tang)為(wei)CS；通過(guo)咔唑反應(ying)檢(jian)測樣品中新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS含(han)(han)量(liang),BCA蛋(dan)(dan)白(bai)定(ding)(ding)量(liang)法檢(jian)測樣品中蛋(dan)(dan)白(bai)含(han)(han)量(liang)。結(jie)果提示(shi)：樣品中新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS含(han)(han)量(liang)達到97%以上,蛋(dan)(dan)白(bai)含(han)(han)量(liang)低于(yu)2%。2.新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS多糖(tang)結(jie)構的(de)(de)初步分析(xi)(xi)：參照(zhao)葡聚糖(tang)分子(zi)(zi)(zi)量(liang)標準物(wu)(wu),經凝膠過(guo)濾HPLC分析(xi)(xi),確定(ding)(ding)所制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)(bei)的(de)(de)NER-CS多糖(tang)平(ping)均(jun)分子(zi)(zi)(zi)量(liang)約為(wei)623.2 kDa。再通過(guo)硫酸(suan)(suan)(suan)軟骨素(su)(su)ABC酶(mei)(mei)(mei)完全降解(jie)(jie),結(jie)合HPLC分析(xi)(xi)二糖(tang)組成,發現NER-CS主要(yao)含(han)(han)有GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中E-unit含(han)(han)量(liang)最高(gao)可達44.5%,同(tong)時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)(han)量(liang)分別為(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫酸(suan)(suan)(suan)化(hua)度為(wei)1.37。是(shi)一(yi)種(zhong)新(xin)型(xing)(xing)(xing)高(gao)硫酸(suan)(suan)(suan)化(hua)CS。3NER-CS生物(wu)(wu)活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)初步分析(xi)(xi)：1)用(yong)Aglyco試(shi)劑盒檢(jian)測NER-CS的(de)(de)抗(kang)凝血活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing),結(jie)果顯(xian)示(shi)：NER-CS抗(kang)FⅡa和(he)(he)抗(kang)FXa活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)分別為(wei)20±2U/mg和(he)(he)0.9±0.2U/mg,是(shi)陽(yang)性(xing)(xing)(xing)(xing)對(dui)照(zhao)肝素(su)(su)抗(kang)FⅡa活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)10%左右(you),抗(kang)FXa活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)4%左右(you)；2)利(li)用(yong)乳腺癌(ai)4T1細胞試(shi)驗轉(zhuan)移(yi)模型(xing)(xing)(xing),分析(xi)(xi)NER-CS在(zai)(zai)小鼠體內抗(kang)腫瘤轉(zhuan)移(yi)活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing),結(jie)果顯(xian)示(shi)：50、100和(he)(he)200μgNER-CS的(de)(de)抑瘤率(lv)分別為(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時陽(yang)性(xing)(xing)(xing)(xing)對(dui)照(zhao)100μg肝素(su)(su)的(de)(de)抑瘤率(lv)為(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)親(qin)(qin)和(he)(he)素(su)(su)修(xiu)飾(shi)的(de)(de)CM5芯(xin)片(pian)固定(ding)(ding)生物(wu)(wu)素(su)(su)化(hua)NER-CS,分析(xi)(xi)NER-CS與五種(zhong)生長(chang)因子(zi)(zi)(zi)、三種(zhong)選擇素(su)(su)的(de)(de)相互(hu)作(zuo)用(yong)活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing),結(jie)果顯(xian)示(shi)NER-CS與生長(chang)因子(zi)(zi)(zi)HGF、bFGF相互(hu)作(zuo)用(yong)活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)較高(gao),親(qin)(qin)和(he)(he)力常數分別為(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)的(de)(de)制(zhi)(zhi)(zhi)備(bei)(bei)及其抗(kang)腫瘤活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)分析(xi)(xi)。