一、石蠟切片厚度一般為多少
石蠟切片厚(hou)(hou)度(du)通(tong)常(chang)為4~7微(wei)(wei)米,切(qie)出一(yi)片(pian)(pian)接一(yi)片(pian)(pian)的(de)(de)蠟帶,用毛(mao)筆輕托輕放在紙上。這個厚(hou)(hou)度(du)通(tong)常(chang)可(ke)以(yi)滿足大部分(fen)實驗室的(de)(de)需求。如果需要更薄的(de)(de)切(qie)片(pian)(pian)厚(hou)(hou)度(du),則可(ke)以(yi)使用微(wei)(wei)切(qie)機進(jin)行切(qie)割,厚(hou)(hou)度(du)可(ke)達(da)1-2微(wei)(wei)米,但這種切(qie)片(pian)(pian)會更脆弱,操作難(nan)度(du)更大。
二、石蠟切片制作過程是什么
石蠟(la)切片的制作步驟如下(xia):
1、組織包埋
(1)乙醇脫水:組(zu)(zu)織經不同濃度的乙(yi)醇溶液進(jin)(jin)行(xing)逐級脫水(shui)70%、80%、90%、95%、100%、100%,各級乙(yi)醇 40min(注意:骨(gu)性及鈣(gai)化組(zu)(zu)織需在JYBL-Ⅱ脫鈣(gai)液中浸(jin)泡24h,待組(zu)(zu)織軟化后再(zai)進(jin)(jin)行(xing)乙(yi)醇脫水(shui)步驟)。
(2)透明:組(zu)織依(yi)次浸泡于三個二甲苯(ben)中(zhong),每(mei)缸(gang)各1h。
(3)浸蠟:組織依次浸泡于三個石(shi)蠟缸中,每缸各1h。
(4)包埋:將液態的石(shi)(shi)蠟(la)(la)倒入模(mo)具盒(he)中(zhong),再將浸好(hao)蠟(la)(la)的組織塊平放(fang)底部(bu),注意切面(mian)方(fang)向朝下(xia)放(fang)置,待石(shi)(shi)蠟(la)(la)凝固后(hou)(hou)去(qu)掉包埋框,完全冷(leng)卻變硬后(hou)(hou)再修整蠟(la)(la)塊,組織外圍的石(shi)(shi)蠟(la)(la)保留(liu)適中(zhong)以(yi)便切片(pian)。
2、切片與貼片
切片制作將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,使石蠟塊的切(qie)面與(yu)刀(dao)(dao)口成(cheng)平行方向,刀(dao)(dao)的傾斜(xie)度通常15℃,轉動輪轉推進器,調節切(qie)片厚度為4μm,切(qie)成(cheng)厚度均勻的切(qie)片。
左手持毛筆,右手旋動切片機轉把,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動,附貼至玻片上的三分之二處。切片貼(tie)附(fu)后,放在空氣(qi)中稍晾干,放置(zhi)65℃烤片機上烤1h,再(zai)放置(zhi)烘(hong)箱內烘(hong)烤2h。
3、石蠟切片脫蠟至水
依次將石(shi)蠟切片放入二甲苯(ben)Ⅰ10min-二甲苯(ben)Ⅱ10min-二甲苯(ben)Ⅲ10min-無(wu)(wu)水乙醇Ⅰ5min-無(wu)(wu)水乙醇Ⅱ5min-90%酒精(jing)(jing)5min-80%酒精(jing)(jing)5min-70%酒精(jing)(jing)5min-50%酒精(jing)(jing)5min梯度脫蠟。
4、HE染色
石蠟(la)切(qie)片入蘇木(mu)素染0.5-1分鐘min,自來水漂(piao)洗(xi),1%鹽(yan)酸酒精(jing)分化(hua)數秒(miao),自來水漂(piao)洗(xi),然后1%氨水水溶液(ye)返藍1min,流(liu)水沖洗(xi)數秒(miao),放入伊紅(hong)染液(ye)中染色數秒(miao),流(liu)水漂(piao)洗(xi)。
5、脫水封片
石蠟切(qie)片依次(ci)放(fang)入75%乙(yi)醇2min-85%乙(yi)醇2min-無水(shui)乙(yi)醇5min-無水(shui)乙(yi)醇5min-二甲苯5min透明,將切(qie)片從二甲苯拿出來中(zhong)性樹(shu)膠封片。