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石蠟切片厚度一般為多少 石蠟切片制作過程是什么

本文章由注冊用戶 哇唔好天氣 上傳提供 2024-11-13 評論 0
摘要:石蠟切片(paraffin section)組織學常規制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態結構,也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。那么下面我們就一起看看,石蠟切片厚度一般為多少以及石蠟切片制作過程是什么吧。

一、石蠟切片厚度一般為多少

石蠟切片厚度(du)通常(chang)為4~7微(wei)米,切(qie)(qie)(qie)出一(yi)片(pian)接一(yi)片(pian)的(de)蠟帶(dai),用毛(mao)筆輕托(tuo)輕放(fang)在紙上(shang)。這(zhe)個厚度(du)通常(chang)可以滿足大(da)(da)部分(fen)實驗室(shi)的(de)需(xu)求。如果需(xu)要更薄的(de)切(qie)(qie)(qie)片(pian)厚度(du),則可以使用微(wei)切(qie)(qie)(qie)機進行(xing)切(qie)(qie)(qie)割,厚度(du)可達1-2微(wei)米,但(dan)這(zhe)種(zhong)切(qie)(qie)(qie)片(pian)會更脆弱,操作難(nan)度(du)更大(da)(da)。

二、石蠟切片制作過程是什么

石蠟切片的制作步(bu)驟如下:

1、組織包埋

(1)乙醇脫水:組織(zhi)經不同(tong)濃(nong)度的乙醇(chun)溶液進(jin)行(xing)逐級脫水70%、80%、90%、95%、100%、100%,各(ge)級乙醇(chun) 40min(注意:骨(gu)性及鈣(gai)化組織(zhi)需在JYBL-Ⅱ脫鈣(gai)液中浸泡24h,待組織(zhi)軟化后再(zai)進(jin)行(xing)乙醇(chun)脫水步驟(zou))。

(2)透明:組織依次浸泡于三(san)個二甲苯中(zhong),每缸各1h。

3)浸蠟:組(zu)織依次浸泡于三個石蠟缸(gang)中,每缸(gang)各1h。

(4)包埋:將(jiang)液態(tai)的石(shi)(shi)(shi)蠟(la)(la)倒入模具盒中,再將(jiang)浸好蠟(la)(la)的組(zu)織(zhi)塊平放(fang)底部(bu),注意切(qie)(qie)面方向朝下放(fang)置(zhi),待石(shi)(shi)(shi)蠟(la)(la)凝固后去掉包(bao)埋框,完全(quan)冷卻變硬(ying)后再修整蠟(la)(la)塊,組(zu)織(zhi)外圍的石(shi)(shi)(shi)蠟(la)(la)保留(liu)適中以(yi)便切(qie)(qie)片。

2、切片與貼片

切片制作將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,使石蠟塊的(de)切(qie)面與刀口成平行方(fang)向(xiang),刀的(de)傾斜度通常15℃,轉動(dong)輪轉推進器,調節切(qie)片厚度為4μm,切(qie)成厚度均勻(yun)的(de)切(qie)片。

左手持毛筆,右手旋動切片機轉把,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動,附貼至玻片上的三分之二處。切片(pian)貼附后(hou),放(fang)(fang)在空氣中(zhong)稍晾(liang)干,放(fang)(fang)置65℃烤(kao)片(pian)機上烤(kao)1h,再(zai)放(fang)(fang)置烘箱內烘烤(kao)2h。

3、石蠟切片脫蠟至水

依次將石(shi)蠟切片(pian)放(fang)入二(er)甲(jia)苯Ⅰ10min-二(er)甲(jia)苯Ⅱ10min-二(er)甲(jia)苯Ⅲ10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-90%酒(jiu)精5min-80%酒(jiu)精5min-70%酒(jiu)精5min-50%酒(jiu)精5min梯(ti)度脫蠟。

4、HE染色

石蠟切片(pian)入蘇(su)木素(su)染(ran)(ran)0.5-1分(fen)鐘min,自(zi)來(lai)水漂洗(xi),1%鹽(yan)酸酒(jiu)精分(fen)化數(shu)秒,自(zi)來(lai)水漂洗(xi),然后1%氨水水溶液(ye)返藍1min,流水沖洗(xi)數(shu)秒,放入伊紅染(ran)(ran)液(ye)中染(ran)(ran)色數(shu)秒,流水漂洗(xi)。

5、脫水封片

石蠟(la)切(qie)片(pian)依次放入75%乙醇(chun)(chun)2min-85%乙醇(chun)(chun)2min-無水(shui)乙醇(chun)(chun)5min-無水(shui)乙醇(chun)(chun)5min-二甲苯5min透明,將切(qie)片(pian)從(cong)二甲苯拿出來中性樹膠封片(pian)。

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