一、石蠟切片厚度一般為多少
石蠟切片厚度通常(chang)為4~7微(wei)米(mi),切出一(yi)片接一(yi)片的蠟(la)帶,用(yong)毛筆輕托輕放在紙上。這(zhe)個厚度通常(chang)可以滿足(zu)大部分實(shi)驗室的需求(qiu)。如(ru)果需要更(geng)薄的切片厚度,則可以使用(yong)微(wei)切機進(jin)行切割(ge),厚度可達1-2微(wei)米(mi),但這(zhe)種(zhong)切片會(hui)更(geng)脆弱,操作難(nan)度更(geng)大。
二、石蠟切片制作過程是什么
石蠟切(qie)片的(de)制作步驟如下:
1、組織包埋
(1)乙醇脫水:組(zu)織經不同濃度的(de)乙醇溶液進行逐級脫(tuo)水70%、80%、90%、95%、100%、100%,各級乙醇 40min(注意(yi):骨性及鈣化(hua)組(zu)織需在JYBL-Ⅱ脫(tuo)鈣液中浸泡24h,待組(zu)織軟(ruan)化(hua)后再進行乙醇脫(tuo)水步(bu)驟)。
(2)透明:組織依次浸泡于三個二甲(jia)苯中(zhong),每(mei)缸各1h。
(3)浸蠟:組織(zhi)依次浸泡于三(san)個石蠟缸中,每缸各(ge)1h。
(4)包埋:將液(ye)態的(de)(de)石蠟倒(dao)入模具盒中,再將浸好蠟的(de)(de)組織塊平放(fang)底(di)部,注意切(qie)面方(fang)向(xiang)朝(chao)下放(fang)置(zhi),待(dai)石蠟凝(ning)固后(hou)去掉包埋框,完全(quan)冷卻變硬(ying)后(hou)再修整蠟塊,組織外(wai)圍的(de)(de)石蠟保留適中以便(bian)切(qie)片。
2、切片與貼片
切片制作將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,使石蠟塊的切(qie)面與刀(dao)口(kou)成(cheng)平行方(fang)向,刀(dao)的傾斜(xie)度通常(chang)15℃,轉(zhuan)動輪轉(zhuan)推(tui)進器(qi),調節切(qie)片厚度為4μm,切(qie)成(cheng)厚度均(jun)勻的切(qie)片。
左手持毛筆,右手旋動切片機轉把,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動,附貼至玻片上的三分之二處。切片貼附后,放在空氣(qi)中稍晾干(gan),放置65℃烤片機上烤1h,再放置烘箱內烘烤2h。
3、石蠟切片脫蠟至水
依次將石蠟切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-無水乙(yi)(yi)醇Ⅰ5min-無水乙(yi)(yi)醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脫蠟。
4、HE染色
石蠟切片入蘇(su)木素染(ran)(ran)0.5-1分(fen)鐘min,自(zi)來(lai)水(shui)(shui)漂洗(xi),1%鹽酸酒精分(fen)化數秒(miao),自(zi)來(lai)水(shui)(shui)漂洗(xi),然后1%氨水(shui)(shui)水(shui)(shui)溶液(ye)返藍1min,流水(shui)(shui)沖洗(xi)數秒(miao),放入伊紅染(ran)(ran)液(ye)中染(ran)(ran)色數秒(miao),流水(shui)(shui)漂洗(xi)。
5、脫水封片
石蠟切片依次放入75%乙(yi)(yi)醇2min-85%乙(yi)(yi)醇2min-無水乙(yi)(yi)醇5min-無水乙(yi)(yi)醇5min-二(er)甲(jia)苯5min透明,將切片從二(er)甲(jia)苯拿出來中性(xing)樹膠封片。