美洲(zhou)大(da)赤魷(you)(DosidicusGigas)在食品(pin)加工(gong)過程(cheng)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)軟(ruan)骨(gu)廢棄物(wu)為原料(liao),建立(li)包括(kuo)粉(fen)碎、脫水脫脂、酶(mei)(mei)解(jie)、除(chu)蛋(dan)白、醇沉、離子(zi)交(jiao)換(huan)、脫鹽等操(cao)作流(liu)程(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)CS制備方(fang)法,制備得(de)到新(xin)(xin)(xin)(xin)型(xing)(xing)CS。最終產品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)產率(lv)達到16±2%。用(yong)(yong)商品(pin)化的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)硫(liu)酸(suan)軟(ruan)骨(gu)素(su)(su)ABC酶(mei)(mei)、硫(liu)酸(suan)皮膚素(su)(su)酶(mei)(mei)、透明質酸(suan)酶(mei)(mei)(來自(zi)于StreptomycesHyalurolyticus)、以及實驗室(shi)自(zi)有(you)產權的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)rHCLase降解(jie)所(suo)得(de)多(duo)糖(tang),根據酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)底物(wu)專一性(xing)(xing),確認所(suo)制備的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)多(duo)糖(tang)為CS;通(tong)過咔唑反應檢(jian)測(ce)樣(yang)品(pin)中新(xin)(xin)(xin)(xin)型(xing)(xing)CS含(han)量,BCA蛋(dan)白定(ding)量法檢(jian)測(ce)樣(yang)品(pin)中蛋(dan)白含(han)量。結(jie)(jie)果提(ti)示(shi):樣(yang)品(pin)中新(xin)(xin)(xin)(xin)型(xing)(xing)CS含(han)量達到97%以上,蛋(dan)白含(han)量低于2%。2.新(xin)(xin)(xin)(xin)型(xing)(xing)CS多(duo)糖(tang)結(jie)(jie)構(gou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)初步分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi):參(can)照葡聚糖(tang)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量標準物(wu),經凝(ning)膠過濾(lv)HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi),確定(ding)所(suo)制備的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)NER-CS多(duo)糖(tang)平(ping)均(jun)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量約為623.2 kDa。再通(tong)過硫(liu)酸(suan)軟(ruan)骨(gu)素(su)(su)ABC酶(mei)(mei)完(wan)全降解(jie),結(jie)(jie)合HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)二(er)糖(tang)組成,發現NER-CS主(zhu)要(yao)含(han)有(you)GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其(qi)中E-unit含(han)量最高(gao)可達44.5%,同(tong)時(shi)(shi)GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)量分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)酸(suan)化度為1.37。是一種(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)(xin)型(xing)(xing)高(gao)硫(liu)酸(suan)化CS。3NER-CS生(sheng)物(wu)活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)初步分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi):1)用(yong)(yong)Aglyco試劑盒檢(jian)測(ce)NER-CS的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)凝(ning)血活(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果顯(xian)(xian)示(shi):NER-CS抗(kang)(kang)FⅡa和抗(kang)(kang)FXa活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為20±2U/mg和0.9±0.2U/mg,是陽(yang)性(xing)(xing)對照肝(gan)素(su)(su)抗(kang)(kang)FⅡa活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)10%左右,抗(kang)(kang)FXa活(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)4%左右;2)利用(yong)(yong)乳腺癌4T1細胞試驗轉(zhuan)移模型(xing)(xing),分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS在小鼠體內抗(kang)(kang)腫瘤(liu)轉(zhuan)移活(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果顯(xian)(xian)示(shi):50、100和200μgNER-CS的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑(yi)(yi)瘤(liu)率(lv)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時(shi)(shi)陽(yang)性(xing)(xing)對照100μg肝(gan)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)抑(yi)(yi)瘤(liu)率(lv)為74.6±1.8%;3)用(yong)(yong)親和素(su)(su)修飾的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)CM5芯片固定(ding)生(sheng)物(wu)素(su)(su)化NER-CS,分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS與五種(zhong)(zhong)生(sheng)長因子(zi)、三種(zhong)(zhong)選擇素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)互作用(yong)(yong)活(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果顯(xian)(xian)示(shi)NER-CS與生(sheng)長因子(zi)HGF、bFGF相(xiang)互作用(yong)(yong)活(huo)性(xing)(xing)較高(gao),親和力常數(shu)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)制備及其(qi)抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)。