美洲大赤魷(you)(DosidicusGigas)在(zai)食(shi)品(pin)加工(gong)過程中的(de)(de)軟(ruan)骨(gu)廢棄物(wu)為(wei)(wei)原(yuan)料,建立包括粉碎、脫(tuo)(tuo)水脫(tuo)(tuo)脂、酶解、除蛋白(bai)(bai)、醇沉、離子(zi)交(jiao)換(huan)、脫(tuo)(tuo)鹽等操(cao)作(zuo)流程的(de)(de)CS制(zhi)(zhi)備(bei)方法,制(zhi)(zhi)備(bei)得到(dao)新(xin)型(xing)CS。最終產品(pin)的(de)(de)產率達到(dao)16±2%。用(yong)商品(pin)化的(de)(de)硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)軟(ruan)骨(gu)素(su)(su)ABC酶、硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)皮膚素(su)(su)酶、透(tou)明質酸(suan)(suan)酶(來自(zi)于StreptomycesHyalurolyticus)、以及實驗(yan)室自(zi)有產權(quan)的(de)(de)rHCLase降解所(suo)(suo)得多糖(tang),根(gen)據(ju)酶的(de)(de)底(di)物(wu)專(zhuan)一(yi)性(xing)(xing),確(que)認所(suo)(suo)制(zhi)(zhi)備(bei)的(de)(de)多糖(tang)為(wei)(wei)CS；通過咔(ka)唑反應檢測樣品(pin)中新(xin)型(xing)CS含量(liang)(liang)(liang),BCA蛋白(bai)(bai)定量(liang)(liang)(liang)法檢測樣品(pin)中蛋白(bai)(bai)含量(liang)(liang)(liang)。結(jie)(jie)果(guo)提示(shi)：樣品(pin)中新(xin)型(xing)CS含量(liang)(liang)(liang)達到(dao)97%以上,蛋白(bai)(bai)含量(liang)(liang)(liang)低于2%。2.新(xin)型(xing)CS多糖(tang)結(jie)(jie)構(gou)的(de)(de)初步分析：參(can)照(zhao)葡聚糖(tang)分子(zi)量(liang)(liang)(liang)標準物(wu),經凝(ning)膠過濾HPLC分析,確(que)定所(suo)(suo)制(zhi)(zhi)備(bei)的(de)(de)NER-CS多糖(tang)平均分子(zi)量(liang)(liang)(liang)約(yue)為(wei)(wei)623.2 kDa。再通過硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)軟(ruan)骨(gu)素(su)(su)ABC酶完(wan)全降解,結(jie)(jie)合HPLC分析二糖(tang)組成,發現NER-CS主要含有GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中E-unit含量(liang)(liang)(liang)最高(gao)可達44.5%,同(tong)時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含量(liang)(liang)(liang)分別(bie)(bie)為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)化度為(wei)(wei)1.37。是一(yi)種(zhong)新(xin)型(xing)高(gao)硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)化CS。3NER-CS生物(wu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)初步分析：1)用(yong)Aglyco試(shi)劑盒檢測NER-CS的(de)(de)抗(kang)凝(ning)血活(huo)(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果(guo)顯(xian)示(shi)：NER-CS抗(kang)FⅡa和(he)(he)抗(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)分別(bie)(bie)為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)(he)0.9±0.2U/mg,是陽性(xing)(xing)對照(zhao)肝素(su)(su)抗(kang)FⅡa活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)10%左(zuo)右,抗(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)4%左(zuo)右；2)利用(yong)乳腺(xian)癌4T1細胞試(shi)驗(yan)轉移模型(xing),分析NER-CS在(zai)小鼠體(ti)內抗(kang)腫瘤轉移活(huo)(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果(guo)顯(xian)示(shi)：50、100和(he)(he)200μgNER-CS的(de)(de)抑瘤率分別(bie)(bie)為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時陽性(xing)(xing)對照(zhao)100μg肝素(su)(su)的(de)(de)抑瘤率為(wei)(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)親和(he)(he)素(su)(su)修飾的(de)(de)CM5芯片固定生物(wu)素(su)(su)化NER-CS,分析NER-CS與五種(zhong)生長因子(zi)、三種(zhong)選擇素(su)(su)的(de)(de)相互作(zuo)用(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果(guo)顯(xian)示(shi)NER-CS與生長因子(zi)HGF、bFGF相互作(zuo)用(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing)較高(gao),親和(he)(he)力(li)常數分別(bie)(bie)為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)的(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei)及其抗(kang)腫瘤活(huo)(huo)性(xing)(xing)分析。
