弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)屬(Vibrio)中霍亂弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(V.cholerae)、引(yin)起一種烈性腸(chang)道傳(chuan)染(ran)病(bing),發病(bing)急、傳(chuan)染(ran)性強、病(bing)死率高,屬于國際(ji)檢(jian)疫傳(chuan)染(ran)病(bing)。
霍亂弧菌包括兩個生物型:古典生物型(Classical biotype)和埃爾托生物型(EL-Tor bio-type)。這(zhe)兩種(zhong)型(xing)別除個別生物學性(xing)狀稍(shao)有(you)不同(tong)外,形態和免疫學性(xing)基本(ben)相(xiang)同(tong),在臨(lin)床病(bing)理及流行病(bing)學特(te)征上沒有(you)本(ben)質的(de)差別。自1817年(nian)以來,全(quan)球共發生了(le)七次世界性(xing)大流行,前(qian)六次病(bing)原是古典型(xing)霍亂(luan)弧(hu)菌(jun),第七次病(bing)原是埃(ai)爾托型(xing)所(suo)致。
1992年(nian)10月(yue)在印度東南部又發現了一個(ge)引起霍(huo)亂(luan)流行的(de)新血清(qing)型菌株(zhu)(0139),它(ta)引起的(de)霍(huo)亂(luan)在臨(lin)床表現及傳播方(fang)式上與古典型霍(huo)亂(luan)完全(quan)相同(tong),但(dan)不能(neng)被01群(qun)霍(huo)亂(luan)弧菌診斷血清(qing)所(suo)凝集,抗01群(qun)的(de)抗血清(qing)對(dui)0139菌株(zhu)無保護性(xing)免(mian)疫。在水中(zhong)的(de)存活時間較01群(qun)霍(huo)亂(luan)弧菌長,因而有可能(neng)成(cheng)為引起世(shi)界性(xing)霍(huo)亂(luan)流行的(de)新菌株(zhu)。
新從病(bing)人分(fen)離出古(gu)典型(xing)霍亂弧(hu)菌和ELtor弧(hu)菌比較(jiao)典型(xing),為(wei)革蘭氏(shi)陰性菌,菌體(ti)彎曲呈弧(hu)狀(zhuang)(zhuang)或逗點狀(zhuang)(zhuang),菌體(ti)一(yi)端(duan)有單根(gen)鞭毛和菌毛,無(wu)莢(jia)膜(mo)與芽胞。經人工培養(yang)后(hou),易失去弧(hu)形(xing)而呈桿(gan)狀(zhuang)(zhuang)。取(qu)霍亂病(bing)人米泔水樣糞(fen)便(bian)作活(huo)菌懸(xuan)滴觀(guan)察(cha),可見(jian)細菌運動(dong)極(ji)為(wei)活(huo)潑,呈流星穿梭(suo)運動(dong)。在液(ye)體(ti)培養(yang)基(ji)內常呈單個、成(cheng)對(dui)成(cheng)鏈狀(zhuang)(zhuang),有的相連呈S形(xing),甚至螺旋狀(zhuang)(zhuang)。
營養要求不高,在PH8.8~9.0的(de)堿性蛋(dan)白(bai)胨(dong)水(shui)(shui)或平板(ban)中生(sheng)長(chang)良好。因(yin)其他細(xi)菌在(zai)這一PH不易生(sheng)長(chang),故堿性蛋(dan)白(bai)胨(dong)水(shui)(shui)可(ke)作為選擇性增(zeng)殖(zhi)霍亂弧菌的(de)培養(yang)基。在(zai)堿性平板(ban)上菌落直徑為2mm,圓形,光滑,透明。
霍(huo)(huo)(huo)亂弧菌能還(huan)原硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan)為(wei)亞硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan),靛(dian)基質反(fan)應(ying)(ying)陽(yang)(yang)性(xing)(xing),當培養在含硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan)及(ji)色(se)氨酸(suan)(suan)的(de)培養基中,產生(sheng)(sheng)靛(dian)基質與(yu)亞硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan),在濃硫酸(suan)(suan)存在時,生(sheng)(sheng)成紅色(se),稱為(wei)霍(huo)(huo)(huo)亂紅反(fan)應(ying)(ying),但其他非(fei)致病性(xing)(xing)弧菌亦有此反(fan)應(ying)(ying),故不(bu)能憑此鑒定霍(huo)(huo)(huo)亂弧菌。EL Tor型(xing)(xing)霍(huo)(huo)(huo)亂弧菌與(yu)古典型(xing)(xing)霍(huo)(huo)(huo)亂弧菌生(sheng)(sheng)化反(fan)應(ying)(ying)有所(suo)不(bu)同。前(qian)者(zhe)(zhe)Vp陽(yang)(yang)性(xing)(xing)而后(hou)者(zhe)(zhe)為(wei)陰(yin)性(xing)(xing)。前(qian)者(zhe)(zhe)能產生(sheng)(sheng)強烈的(de)溶(rong)(rong)(rong)血素,溶(rong)(rong)(rong)解(jie)羊(yang)紅細胞,在血平板上生(sheng)(sheng)長的(de)菌落周圍(wei)出現明顯的(de)透明溶(rong)(rong)(rong)血環,古典型(xing)(xing)霍(huo)(huo)(huo)亂弧菌則不(bu)溶(rong)(rong)(rong)解(jie)羊(yang)紅細胞。個別EL Tor型(xing)(xing)霍(huo)(huo)(huo)亂弧菌株亦不(bu)溶(rong)(rong)(rong)血。
根(gen)據弧菌O抗原不(bu)同,分成Ⅵ個血清群,第(di)(di)Ⅰ群包括(kuo)霍亂弧菌的兩(liang)個生物型(xing)(xing)(xing)。第(di)(di)Ⅰ群A、B、C三(san)種抗原成份可將霍亂弧菌分為三(san)個血清型(xing)(xing)(xing):含AC者(zhe)為原型(xing)(xing)(xing)(又稱稻葉(xie)型(xing)(xing)(xing)),含AB者(zhe)為異型(xing)(xing)(xing)(又稱小川型(xing)(xing)(xing)),A、B、C均有者(zhe)稱中間(jian)型(xing)(xing)(xing)(彥島型(xing)(xing)(xing))。
霍亂弧(hu)菌(jun)古(gu)典生物(wu)型對(dui)外(wai)環境抵(di)抗力較弱(ruo),EL-Tor生物(wu)型抵(di)抗力較強,在(zai)河水(shui)、井(jing)水(shui)、海水(shui)中(zhong)可存活(huo)1~3周(zhou),在(zai)鮮魚,貝殼類食(shi)物(wu)上(shang)存活(huo)1~2周(zhou)。
霍亂(luan)弧菌對熱,干燥,日光,化學消毒劑和酸均很敏感,耐低溫,耐堿。濕熱55℃,15分(fen)鐘(zhong)(zhong),100℃,1~2分(fen)鐘(zhong)(zhong),水中加0.5ppm氯(lv)15分(fen)鐘(zhong)(zhong)可被殺死。0.1%高錳(meng)酸鉀浸泡蔬菜、水果可達到(dao)消毒目(mu)的。在正(zheng)常胃酸中僅生存4分(fen)鐘(zhong)(zhong)。
能(neng)發酵(jiao)葡萄(tao)糖(tang)(tang)(tang)、麥芽糖(tang)(tang)(tang)、甘露醇、蔗糖(tang)(tang)(tang)、半乳糖(tang)(tang)(tang)等產酸(suan)(suan)產氣,遲(chi)緩(huan)發酵(jiao)乳糖(tang)(tang)(tang)。不分解阿拉伯糖(tang)(tang)(tang)、水楊素、衛矛醇、鼠李(li)糖(tang)(tang)(tang)、木(mu)糖(tang)(tang)(tang)、側金(jin)盞花(hua)醇和肌醇。氧化酶(mei)、明膠液化試(shi)(shi)驗陽性(xing)(xing)(xing)。V-P試(shi)(shi)驗大多(duo)(duo)數EL-Tor生物型陽性(xing)(xing)(xing),而古典生物型大多(duo)(duo)為(wei)陰性(xing)(xing)(xing)。霍亂(luan)(luan)弧菌(jun)能(neng)分解色氨酸(suan)(suan)產生吲哚(duo)(duo),同時能(neng)還原硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)為(wei)亞硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)。因此當霍亂(luan)(luan)弧菌(jun)培養在含硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)的蛋白(bai)胨水中(zhong),所產生的亞硝(xiao)酸(suan)(suan)鹽(yan)(yan)(yan)與(yu)吲哚(duo)(duo)結合成亞硝(xiao)基(ji)吲哚(duo)(duo),滴加濃硫酸(suan)(suan)即出現薔薇色,稱為(wei)霍亂(luan)(luan)紅試(shi)(shi)驗陽性(xing)(xing)(xing)。
根據(ju)弧(hu)(hu)菌O抗原不(bu)同,分成Ⅵ個血(xue)清(qing)群(qun),第Ⅰ群(qun)包括霍(huo)亂弧(hu)(hu)菌的兩個生物(wu)型(xing)(xing)(xing)(xing)。第Ⅰ群(qun)A、B、C三種抗原成份可將霍(huo)亂弧(hu)(hu)菌分為(wei)(wei)三個血(xue)清(qing)型(xing)(xing)(xing)(xing):含AC者(zhe)為(wei)(wei)原型(xing)(xing)(xing)(xing)(又(you)稱(cheng)稻葉型(xing)(xing)(xing)(xing)),含AB者(zhe)為(wei)(wei)異型(xing)(xing)(xing)(xing)(又(you)稱(cheng)小川型(xing)(xing)(xing)(xing)),A、B、C均(jun)有者(zhe)稱(cheng)中間型(xing)(xing)(xing)(xing)(彥島型(xing)(xing)(xing)(xing))。
1992年10月在印(yin)度東南(nan)部(bu)又發現(xian)了一(yi)個引(yin)起霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)流行(xing)的(de)新血清型(xing)菌(jun)(jun)株(0139),它(ta)引(yin)起的(de)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)在臨床表現(xian)及傳播方式上(shang)與古(gu)典型(xing)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)完(wan)全(quan)相同,但不能(neng)被01群霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)診(zhen)斷(duan)血清所凝集(ji),抗01群的(de)抗血清對0139菌(jun)(jun)株無保護性(xing)免疫。在水中的(de)存活時間(jian)較01群霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)長,因(yin)而有可能(neng)成為引(yin)起世界性(xing)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)流行(xing)的(de)新菌(jun)(jun)株,推薦使用天津生物(wu)芯片生產的(de)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)診(zhen)斷(duan)血清。
1,普通聚合酶鏈反(fan)應法
核酸(suan)擴(kuo)增技術,即聚合酶鏈式反應(ying)(polymerase chainreaction,PCR),其基(ji)(ji)(ji)本原(yuan)(yuan)理是設計、合成兩條寡核苷(gan)酸(suan),作(zuo)為(wei)引物,對應(ying)于待測病原(yuan)(yuan)微生物某一段(duan)特異(yi)性(xing)序(xu)列(lie)(lie)的兩端(duan),然(ran)后在體外(wai)模擬DNA體內復(fu)制(zhi)的過程反復(fu)擴(kuo)增,使靶序(xu)列(lie)(lie)放大(da)上(shang)萬倍甚至(zhi)上(shang)百萬倍而被檢測出來。一般選擇霍亂(luan)腸毒(du)素(su)(cholera enterotoxin,CT)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)ctx的保(bao)守序(xu)列(lie)(lie)作(zuo)為(wei)靶基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)。一些非產毒(du)株(如環境來源的菌(jun)(jun)株)有可能通過基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)水平轉移獲得毒(du)力(li)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)成為(wei)產毒(du)株,若(ruo)僅檢測ctx基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)容易造成漏(lou)檢。因(yin)(yin)(yin)(yin)此,霍亂(luan)弧菌(jun)(jun)的其他(ta)重要基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin),如毒(du)力(li)協同調(diao)節(jie)菌(jun)(jun)毛(mao)A基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(tcp A)、o抗原(yuan)(yuan)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(rfb)、外(wai)膜蛋(dan)白基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(omp)以(yi)及毒(du)力(li)表達調(diao)控(kong)基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin)(toxR)等也被選用為(wei)PcR的靶基(ji)(ji)(ji)因(yin)(yin)(yin)(yin),這大(da)大(da)提(ti)高(gao)了檢測的特異(yi)度.
2,多重(zhong)PCR法
與常(chang)規(gui)PCR相比,多(duo)(duo)重PCR一(yi)次反(fan)應可(ke)檢(jian)測多(duo)(duo)個基(ji)因(yin)(yin),節省了時間(jian)和成(cheng)(cheng)本(ben)。國內、外(wai)許多(duo)(duo)學者選用霍(huo)亂弧菌(jun)的(de)毒素基(ji)因(yin)(yin)ctx、tcp與其(qi)他基(ji)因(yin)(yin)如ompW、rfb、hly進行組(zu)合(he),作(zuo)為共(gong)同(tong)的(de)靶基(ji)因(yin)(yin),克(ke)服(fu)了由(you)于毒力基(ji)因(yin)(yin)特(te)異(yi)度不夠高而(er)造成(cheng)(cheng)的(de)假陽(yang)性(xing)。多(duo)(duo)重PcR同(tong)時可(ke)準確區分不同(tong)血清型的(de)霍(huo)亂弧菌(jun)和快速鑒定其(qi)是否(fou)為產毒株,可(ke)謂(wei)一(yi)舉(ju)多(duo)(duo)得,大大提高了檢(jian)測效率。
3.熒光定量(liang)PCR法(fa)
熒光(guang)定量PCR自動化(hua)程度高(gao)、特異(yi)性強、無(wu)交(jiao)叉污染,在霍亂弧菌的(de)快(kuai)速診(zhen)斷中得到廣泛應用(yong)。尤其是近年(nian)來,隨著引物與(yu)探針的(de)設(she)計更精(jing)確、多(duo)通道(dao)熒光(guang)PCR儀的(de)開(kai)發與(yu)廣泛使用(yong),多(duo)重熒光(guang)定量PCR技術(shu)日臻(zhen)成(cheng)熟(shu),并以其高(gao)通量、低成(cheng)本、高(gao)效率等優點而廣泛應用(yong)于(yu)病毒、細菌、真菌等多(duo)種病原體的(de)快(kuai)速檢測(ce),成(cheng)為應用(yong)的(de)熱點.
與(yu)PCR方(fang)法相比,基(ji)因芯(xin)(xin)片(pian)(pian)技術(shu)(shu)能同時獲(huo)得更多病(bing)原學、生物(wu)學方(fang)面(mian)(mian)的信(xin)息(xi),從而(er)更為全面(mian)(mian)地分(fen)析(xi)、掌握病(bing)原微生物(wu)的特(te)征。Vora等運用基(ji)因芯(xin)(xin)片(pian)(pian)技術(shu)(shu)對(dui)多種(zhong)致病(bing)性(xing)弧菌(jun)的毒(du)力、毒(du)素、耐藥(yao)基(ji)因及潛在的毒(du)力基(ji)因進行(xing)全面(mian)(mian)分(fen)析(xi),對(dui)掌握這些細菌(jun)的致病(bing)性(xing)及進行(xing)有(you)效(xiao)預防、控制等具有(you)重要意義。但基(ji)因芯(xin)(xin)片(pian)(pian)成本較高,距離推廣應用尚需時間等待。
人類在(zai)自(zi)然情況下是(shi)霍(huo)亂弧(hu)菌(jun)(jun)(jun)的唯一易(yi)感者(zhe),主要通過(guo)污染的水源(yuan)或飲食物經口傳染。在(zai)一定條件下,霍(huo)亂弧(hu)菌(jun)(jun)(jun)進(jin)入(ru)小(xiao)腸(chang)(chang)后,依靠鞭(bian)毛的運動,穿過(guo)粘膜表面的粘液層,可能藉菌(jun)(jun)(jun)毛作(zuo)用(yong)粘附于腸(chang)(chang)壁上(shang)皮(pi)細(xi)胞上(shang),在(zai)腸(chang)(chang)粘膜表面迅速(su)繁(fan)殖(zhi),經過(guo)短暫的潛(qian)伏期(qi)后便急(ji)驟(zou)發病(bing)。該菌(jun)(jun)(jun)不侵(qin)入(ru)腸(chang)(chang)上(shang)皮(pi)細(xi)胞和腸(chang)(chang)腺(xian),也(ye)不侵(qin)入(ru)血流,僅在(zai)局部繁(fan)殖(zhi)和產生霍(huo)亂腸(chang)(chang)毒(du)素,此毒(du)素作(zuo)用(yong)于粘膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞與腸(chang)(chang)腺(xian)使腸(chang)(chang)液過(guo)度分泌,從而患者(zhe)出現上(shang)吐下瀉,瀉出物呈“米(mi)泔水樣”并含大量弧(hu)菌(jun)(jun)(jun),此為本(ben)病(bing)典型(xing)的特征(zheng)。
霍(huo)亂腸(chang)毒(du)素(su)本質(zhi)是蛋白(bai)質(zhi),不耐熱,56℃經30分鐘,即可破壞其活性。對(dui)蛋白(bai)酶(mei)敏感而對(dui)胰蛋白(bai)酶(mei)抵(di)抗(kang)。該毒(du)素(su)屬外毒(du)素(su),具有很強的(de)抗(kang)原性。現(xian)已能將該毒(du)素(su)高度精(jing)制成(cheng)晶狀,仍保持極強的(de)生物(wu)學(xue)活性。
霍亂腸(chang)毒(du)素(su)(su)(su)致病機(ji)理如下:毒(du)素(su)(su)(su)由(you)A和(he)(he)B兩個亞單(dan)位(wei)(wei)組成,A亞單(dan)位(wei)(wei)又分為(wei)A1和(he)(he)A2兩個肽(tai)鏈(lian)(lian),兩者(zhe)依靠二硫鏈(lian)(lian)連接(jie)。A亞單(dan)位(wei)(wei)為(wei)毒(du)性單(dan)位(wei)(wei),其(qi)中A1肽(tai)鏈(lian)(lian)具(ju)有酶活(huo)性,A2肽(tai)鏈(lian)(lian)與B亞單(dan)位(wei)(wei)結合參與受體(ti)(ti)(ti)(ti)介導的內吞作用中的轉位(wei)(wei)作用。B亞單(dan)位(wei)(wei)為(wei)結合單(dan)位(wei)(wei),能特(te)異(yi)地識別腸(chang)上皮(pi)細(xi)胞(bao)(bao)上的受體(ti)(ti)(ti)(ti)。1個毒(du)素(su)(su)(su)分子由(you)一個A亞單(dan)位(wei)(wei)和(he)(he)4℃6個B亞單(dan)位(wei)(wei)組成多聚體(ti)(ti)(ti)(ti)。霍亂腸(chang)毒(du)素(su)(su)(su)作用于腸(chang)細(xi)胞(bao)(bao)膜表(biao)面上的受體(ti)(ti)(ti)(ti)(由(you)神經(jing)節苷(gan)脂GM1組成),其(qi)B亞單(dan)位(wei)(wei)與受體(ti)(ti)(ti)(ti)結合,使(shi)毒(du)素(su)(su)(su)分子變構,A精致單(dan)位(wei)(wei)進入(ru)細(xi)胞(bao)(bao),A1肽(tai)鏈(lian)(lian)活(huo)化,進而激(ji)活(huo)腺(xian)苷(gan)環化酶(AC),使(shi)三磷酸腺(xian)苷(gan)(ATP)轉化為(wei)環磷酸腺(xian)苷(gan)(cAMP),細(xi)胞(bao)(bao)內cAMP濃(nong)度(du)增高,導致腸(chang)粘膜細(xi)胞(bao)(bao)分泌(mi)功能大(da)(da)為(wei)亢進,使(shi)大(da)(da)量(liang)(liang)體(ti)(ti)(ti)(ti)液和(he)(he)電解(jie)質進入(ru)腸(chang)腔(qiang)而發生(sheng)劇烈吐(tu)瀉,由(you)于大(da)(da)量(liang)(liang)脫水和(he)(he)失(shi)鹽(yan),可發生(sheng)代謝性酸中毒(du),血(xue)循(xun)環衰竭,甚至休克(ke)或死亡。
霍亂弧菌(jun)產生腸毒(du)素,是一種劇(ju)烈的(de)致(zhi)泄毒(du)素。該毒(du)素作用于腸壁促(cu)使腸黏膜細胞極度分泌從而使水(shui)和(he)(he)鹽(yan)過(guo)量(liang)排出,導致(zhi)嚴重脫水(shui)虛脫;進而引起代謝性(xing)酸中毒(du)和(he)(he)急性(xing)腎功能衰竭。
引起(qi)烈性腸道傳染(ran)(ran)病霍亂(luan),為(wei)我(wo)國的甲類(lei)(lei)法定傳染(ran)(ran)病。在自然情況下(xia),人(ren)類(lei)(lei)是(shi)霍亂(luan)弧菌的唯一易感者。在地方性流(liu)行(xing)區(qu),除病人(ren)外,無癥狀感染(ran)(ran)者也(ye)是(shi)重要傳染(ran)(ran)源。高比(bi)例的無癥狀攜帶(dai)者有利于疾病的擴散,根據衛生狀況,無癥狀攜帶(dai)者和病人(ren)的比(bi)率波動在10:1~100:1之(zhi)間。
傳播途徑(jing)主要(yao)是(shi)通過(guo)污(wu)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)水(shui)源或未煮熟的(de)(de)(de)食(shi)物(wu)(wu)如(ru)海產品、蔬菜經口攝入。居(ju)住擁(yong)擠,衛生狀況差,特別(bie)是(shi)公用(yong)水(shui)源是(shi)造(zao)成暴(bao)發(fa)流(liu)行的(de)(de)(de)重要(yao)因素。人(ren)與人(ren)之(zhi)間的(de)(de)(de)直接(jie)傳播不常(chang)見。在正(zheng)常(chang)胃酸條件下,如(ru)以水(shui)為載體(ti),需(xu)飲入大于1010個(ge)(ge)細菌(jun)(jun)方(fang)能(neng)引起感染(ran)(ran)(ran);如(ru)以食(shi)物(wu)(wu)作(zuo)為載體(ti),由于食(shi)物(wu)(wu)高強(qiang)度的(de)(de)(de)緩沖能(neng)力,感染(ran)(ran)(ran)劑量可(ke)(ke)減少到102~104個(ge)(ge)細菌(jun)(jun)。任何能(neng)降低胃中(zhong)酸度的(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)或其他原因,都可(ke)(ke)使人(ren)對(dui)霍亂弧菌(jun)(jun)感染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)敏感性增加。
病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)菌(jun)到(dao)達(da)(da)小腸后(hou),粘附于(yu)腸粘膜(mo)(mo)表面并(bing)迅速(su)繁殖(zhi)(zhi),不(bu)侵入腸上皮細(xi)胞(bao)和(he)腸腺(xian),細(xi)菌(jun)在(zai)(zai)繁殖(zhi)(zhi)過程中(zhong)產生腸毒素而致(zhi)(zhi)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)。O1群霍亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)感(gan)染(ran)可(ke)從無(wu)(wu)(wu)癥(zheng)狀(zhuang)(zhuang)或(huo)(huo)輕型腹(fu)(fu)(fu)瀉(xie)(xie)到(dao)嚴(yan)(yan)重(zhong)的致(zhi)(zhi)死(si)性腹(fu)(fu)(fu)瀉(xie)(xie)。在(zai)(zai)古典生物(wu)(wu)型霍亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)感(gan)染(ran)中(zhong),無(wu)(wu)(wu)癥(zheng)狀(zhuang)(zhuang)者可(ke)達(da)(da)60%,在(zai)(zai)El Tor生物(wu)(wu)型感(gan)染(ran)中(zhong),無(wu)(wu)(wu)癥(zheng)狀(zhuang)(zhuang)者可(ke)達(da)(da)75%。霍亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)古典生物(wu)(wu)型所致(zhi)(zhi)疾病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)較El Tor生物(wu)(wu)型嚴(yan)(yan)重(zhong)。典型病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)例一(yi)般(ban)在(zai)(zai)吞食(shi)細(xi)菌(jun)后(hou)2~3天(tian)突(tu)然(ran)出(chu)現劇烈腹(fu)(fu)(fu)瀉(xie)(xie)和(he)嘔吐(tu),多(duo)無(wu)(wu)(wu)腹(fu)(fu)(fu)痛,每天(tian)大(da)(da)便數次(ci)或(huo)(huo)數十次(ci)。在(zai)(zai)疾病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)最嚴(yan)(yan)重(zhong)時(shi)(shi),每小時(shi)(shi)失水量可(ke)高達(da)(da)1升,排出(chu)由(you)粘膜(mo)(mo)、上皮細(xi)胞(bao)和(he)大(da)(da)量弧(hu)(hu)菌(jun)構成的如米泔(gan)水樣的腹(fu)(fu)(fu)瀉(xie)(xie)物(wu)(wu)。由(you)于(yu)大(da)(da)量水分和(he)電解質喪失而導致(zhi)(zhi)失水,代謝(xie)性酸中(zhong)毒,低(di)堿血癥(zheng)和(he)低(di)容(rong)量性休克及(ji)心(xin)力不(bu)齊和(he)腎衰竭,如未(wei)經治療處理,病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)人(ren)可(ke)在(zai)(zai)12~24小時(shi)(shi)內死(si)亡,死(si)亡率高達(da)(da)25%~60%,但若(ruo)及(ji)時(shi)(shi)給病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)人(ren)補充液體及(ji)電解質,死(si)亡率可(ke)小于(yu)1%。O139群霍亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)感(gan)染(ran)比O1群嚴(yan)(yan)重(zhong),表現為(wei)嚴(yan)(yan)重(zhong)脫水和(he)高死(si)亡率,且成人(ren)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)例所占比例較高,大(da)(da)于(yu)70%,而O1群霍亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)流行高峰期(qi),兒童病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)例約占60%。
病(bing)愈后(hou)一些患者(zhe)(zhe)可短(duan)期帶菌(jun)(jun),一般不(bu)超過3~4周,真正的慢性(xing)帶菌(jun)(jun)者(zhe)(zhe)罕見(jian)。病(bing)菌(jun)(jun)主要存在于(yu)膽(dan)囊(nang)中。
患過霍亂(luan)的人(ren)(ren)可獲(huo)得牢固的免(mian)疫力,再感(gan)染者(zhe)少(shao)見。病(bing)人(ren)(ren)在(zai)發病(bing)數(shu)日(ri),血液中即(ji)可出(chu)現特異(yi)性抗體(ti),7℃14天抗體(ti)滴度(du)達高峰,隨后逐(zhu)漸下降至較低水平(ping),但能持續約3個月之外。病(bing)后小腸內(nei)可出(chu)現分泌型lgA。體(ti)液抗體(ti)與(yu)免(mian)疫的關(guan)系(xi)尚不清楚,一(yi)般認為局部SlgA可在(zai)腸粘膜與(yu)病(bing)菌(jun)之間(jian)形成免(mian)疫屏障,有阻斷(duan)粘附和中和毒素的作用。
由于(yu)霍亂(luan)流(liu)行迅速,且在流(liu)行期間發病(bing)率(lv)(lv)及死亡率(lv)(lv)均高,危害極(ji)大,因此(ci)早(zao)期迅速和(he)正確的診(zhen)斷,對治療和(he)預防本(ben)病(bing)的蔓延有重大意義。
采取病人“米泔水樣”大便或嘔吐(tu)物(wu)。鏡(jing)檢(jian)(涂片染色及懸滴法(fa)檢(jian)查(cha))觀察細(xi)菌形態,動力特征。
可將材料接種至堿性(xing)蛋白胨水37℃培養6~8小時(shi)后(hou),取生長物(wu)(wu)作(zuo)形態(tai)觀察,并轉種于堿性(xing)平板作(zuo)分(fen)離(li)培養,取可疑(yi)菌落作(zuo)玻片凝集(ji),陽性(xing)者再作(zuo)生化反(fan)應及生物(wu)(wu)型別鑒(jian)定(ding)試驗。
取檢材或(huo)新(xin)鮮(xian)堿(jian)性(xing)蛋(dan)白胨水培養物一滴,置(zhi)于載玻片上,再(zai)加霍亂弧菌多價診(zhen)斷血(xue)清(qing),加蓋玻片,用暗視(shi)野鏡觀察,3分鐘內運動(dong)被抑制的(de)即為(wei)陽性(xing),此法優點是快(kuai)速而(er)特異操作簡(jian)便,但(dan)必須有數(shu)量較多的(de)弧菌才檢出。
除一(yi)般免疫熒光(guang)法(fa)外,還可用熒光(guang)菌球法(fa)檢查。
霍亂(luan)弧菌所致(zhi)的(de)霍亂(luan),為烈性(xing)腸道傳染(ran)病(bing),曾在世界上發(fa)生過幾次大流行,至今(jin)仍(reng)未平息,因(yin)此,霍亂(luan)被列(lie)為國境檢疫的(de)傳染(ran)病(bing)。
霍亂弧(hu)菌(jun)有兩(liang)個生物型,一為古(gu)典(dian)生物型,一為愛(ai)爾托生物型,這(zhe)兩(liang)個生物型在形(xing)態及血清(qing)學性(xing)狀方面幾乎(hu)相同,可作第四組霍亂噬菌(jun)體裂解試驗,多粘(zhan)菌(jun)素B敏感試驗,雞紅(hong)細胞凝集試驗,V-P(服-潑)二氏試驗等試驗加(jia)以鑒別:
本(ben)菌是需(xu)氧菌,營養要求不(bu)高,在(zai)普通培(pei)養基(ji)上(shang)(shang)生長(chang)(chang)(chang)良好。霍亂弧菌具有耐堿(jian)性,故常用堿(jian)性(pH值8.4~9.2)培(pei)養基(ji)選擇性分(fen)離培(pei)養本(ben)菌。在(zai)堿(jian)性瓊脂(zhi)(zhi)平板上(shang)(shang)生長(chang)(chang)(chang)后,呈水滴樣光滑(hua)型菌落,而在(zai)堿(jian)性蛋白(bai)胨液(ye)體培(pei)養基(ji)中,生長(chang)(chang)(chang)迅速(su),培(pei)養6~8小時(shi)即可(ke)(ke)形(xing)成菌膜,利用這一特點,可(ke)(ke)以作快速(su)增菌,進行鑒定。在(zai)慶大霉素瓊脂(zhi)(zhi)平板上(shang)(shang),生長(chang)(chang)(chang)快,8~10小時(shi)能(neng)生長(chang)(chang)(chang)出小菌落,可(ke)(ke)供鑒定用。霍亂弧菌能(neng)分(fen)解蔗糖(tang)、甘露醇(chun),產(chan)酸不(bu)產(chan)氣,不(bu)能(neng)分(fen)解阿(a)拉伯膠糖(tang)。
霍(huo)亂弧菌(jun)(jun)在(zai)未經(jing)處理的(de)(de)糞便中(zhong),可(ke)(ke)存(cun)(cun)(cun)(cun)活(huo)(huo)數天(tian);在(zai)冰(bing)箱內的(de)(de)牛奶、鮮肉(rou)和魚(yu)(yu)蝦水(shui)產品中(zhong)存(cun)(cun)(cun)(cun)活(huo)(huo)時(shi)(shi)(shi)間(jian)分(fen)(fen)(fen)別(bie)為2~4周(zhou)、1周(zhou)和1~3周(zhou);在(zai)室(shi)溫下存(cun)(cun)(cun)(cun)放(fang)的(de)(de)新鮮蔬菜(cai)中(zhong),可(ke)(ke)存(cun)(cun)(cun)(cun)活(huo)(huo)1~5天(tian);在(zai)砧(zhen)板(ban)和布(bu)上可(ke)(ke)存(cun)(cun)(cun)(cun)活(huo)(huo)相當(dang)長(chang)時(shi)(shi)(shi)間(jian);在(zai)玻璃、瓷器、塑料和金屬上存(cun)(cun)(cun)(cun)活(huo)(huo)時(shi)(shi)(shi)間(jian)不(bu)超(chao)過2天(tian)。霍(huo)亂弧菌(jun)(jun)古(gu)典生物(wu)型(xing)在(zai)外界(jie)環境中(zhong)生存(cun)(cun)(cun)(cun)能力(li)不(bu)強(qiang),而愛爾托(tuo)生物(wu)型(xing)抵(di)抗(kang)力(li)較強(qiang),在(zai)河(he)水(shui)、井(jing)水(shui)、池塘水(shui)和海水(shui)中(zhong)可(ke)(ke)存(cun)(cun)(cun)(cun)活(huo)(huo)1~3周(zhou),甚至更長(chang),有時(shi)(shi)(shi)在(zai)局部自然水(shui)中(zhong)也能越冬。愛爾托(tuo)生物(wu)型(xing)弧菌(jun)(jun)可(ke)(ke)粘附于海洋甲(jia)殼類生物(wu)表面,分(fen)(fen)(fen)泌甲(jia)殼酶,分(fen)(fen)(fen)解甲(jia)殼作為營養而長(chang)期存(cun)(cun)(cun)(cun)活(huo)(huo),如愛爾托(tuo)生物(wu)型(xing)弧菌(jun)(jun)被人工飼養的(de)(de)泥鰍、鱔魚(yu)(yu)吞食后,可(ke)(ke)在(zai)其體內生長(chang)繁殖,然后排(pai)入水(shui)中(zhong)。
霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)對(dui)熱(re)、干燥、日光及一般消毒(du)劑均很敏感(gan),經干燥2小(xiao)時或(huo)加熱(re)55℃10分(fen)鐘即可死亡(wang),煮沸立(li)即死亡(wang);對(dui)酸(suan)敏感(gan),在(zai)(zai)正常胃(wei)酸(suan)中僅能存(cun)活4分(fen)鐘,接觸1∶5000~1∶10000鹽酸(suan)或(huo)硫酸(suan)、1∶2000~1∶3000升汞(gong)或(huo)1∶500000高錳酸(suan)鉀,數分(fen)鐘即被殺滅(mie),在(zai)(zai)0.1%漂白粉(fen)中10分(fen)鐘內即可死亡(wang)。氯化鈉(na)的(de)濃(nong)度(du)高于4%或(huo)蔗糖(tang)濃(nong)度(du)在(zai)(zai)5%以上(shang)的(de)食物、香料(liao)、醋及酒等,均不(bu)利(li)于霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)的(de)生(sheng)存(cun)。
正常(chang)胃酸可殺(sha)滅(mie)霍亂弧菌(jun),當胃酸分泌缺乏(fa)或低下,或入(ru)侵的霍亂弧菌(jun)數量較多,未被殺(sha)滅(mie)的弧菌(jun)就進(jin)入(ru)小(xiao)腸,在(zai)堿性腸液內迅速繁殖,并通過(guo)粘(zhan)液對細菌(jun)的趨(qu)化吸引作用、細菌(jun)鞭毛(mao)活動及(ji)弧菌(jun)粘(zhan)蛋白溶解酶(mei)和粘(zhan)附(fu)素等的作用,粘(zhan)附(fu)于小(xiao)腸粘(zhan)膜的上皮細胞表面,并在(zai)此大(da)量繁殖。
此菌產生強烈的外毒素,即霍亂腸毒素,由A亞單位和B亞單位組成。B亞單位與該處粘膜上皮細胞表面受體——神經節苷脂結合,A、B兩種亞單位解離,A亞單位穿過細胞膜進入細胞內,激活腺苷酸環化酶(AC),使細胞內三磷酸腺苷(ATP)轉化為環磷酸腺苷(cAMP),使細胞內環磷酸腺苷含量提高,促使一系列酶反應加速進(jin)行,導致(zhi)(zhi)(zhi)空腸(chang)到(dao)回腸(chang)部腺細(xi)(xi)胞(bao)(bao)分泌功(gong)能(neng)亢(kang)進(jin),引起大量(liang)液(ye)(ye)體及(ji)血漿中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)鈉(na)(na)、鉀(jia)、氯等離子(zi)進(jin)入腸(chang)腔(qiang),由(you)(you)于(yu)(yu)分泌功(gong)能(neng)超過腸(chang)道(dao)再吸(xi)收能(neng)力,從而造(zao)(zao)成(cheng)嚴重(zhong)的(de)腹瀉及(ji)嘔(ou)吐;由(you)(you)于(yu)(yu)膽(dan)汁分泌減(jian)少(shao),且腸(chang)腔(qiang)中(zhong)(zhong)(zhong)有大量(liang)水(shui)、粘液(ye)(ye)及(ji)電(dian)解質,故排瀉物呈白(bai)色“米(mi)泔水(shui)”樣;由(you)(you)于(yu)(yu)劇(ju)烈吐瀉,導致(zhi)(zhi)(zhi)脫(tuo)水(shui)和(he)電(dian)解質丟(diu)失,引起缺(que)鉀(jia)、缺(que)鈉(na)(na)及(ji)肌肉痙(jing)攣;由(you)(you)于(yu)(yu)碳酸氫根離子(zi)丟(diu)失,酸性代謝物在體內蓄積,引起代謝性酸中(zhong)(zhong)(zhong)毒;由(you)(you)于(yu)(yu)有效血容(rong)量(liang)急(ji)(ji)劇(ju)減(jian)少(shao),血液(ye)(ye)濃縮,導致(zhi)(zhi)(zhi)尿量(liang)減(jian)少(shao)、血壓下降,甚(shen)至休克;由(you)(you)于(yu)(yu)腎缺(que)血、缺(que)氧,細(xi)(xi)胞(bao)(bao)內缺(que)鉀(jia),導致(zhi)(zhi)(zhi)腎小管上皮細(xi)(xi)胞(bao)(bao)變性、壞死,造(zao)(zao)成(cheng)急(ji)(ji)性腎功(gong)能(neng)衰竭。
主要(yao)病變均由(you)嚴(yan)重(zhong)脫水引起,臨床(chuang)可見指紋皺縮,皮下組織及肌(ji)肉干(gan)癟(bie)。心、肝(gan)、脾等(deng)臟器(qi)(qi)均見縮小(xiao)。內(nei)臟漿膜(mo)(mo)無光澤(ze)。腸腔高度擴(kuo)張、腸內(nei)充(chong)滿泔水樣液體,腸粘(zhan)(zhan)膜(mo)(mo)松弛,但粘(zhan)(zhan)膜(mo)(mo)上(shang)皮完整,無潰瘍。膽囊內(nei)充(chong)滿粘(zhan)(zhan)稠膽汁。腎小(xiao)球(qiu)及間(jian)質的毛細管(guan)擴(kuo)張,腎小(xiao)管(guan)腫脹(zhang)、變性(xing)及壞死(si)。其他(ta)臟器(qi)(qi)也有出血、變性(xing)等(deng)變化(hua)。
必須貫徹預防為主的方(fang)針,作好(hao)對外(wai)交往及入口的檢疫工(gong)作,嚴防本菌(jun)傳入,此外(wai)應加強水、糞管理,注意飲食(shi)衛生。對病人要(yao)嚴格(ge)隔(ge)離,必要(yao)時實行(xing)疫區封鎖,以免疾病擴散蔓延。
人群(qun)的(de)(de)菌(jun)(jun)(jun)苗(miao)預(yu)防(fang)接(jie)種,可獲良(liang)好效果,現(xian)用(yong)(yong)加熱或化學藥品殺死的(de)(de)古典型霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)菌(jun)(jun)(jun)苗(miao)皮下接(jie)種,能降低發(fa)病率。這種苗(miao)菌(jun)(jun)(jun)對(dui)EL-Tor型霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧菌(jun)(jun)(jun)感染也有保護作用(yong)(yong),但持續時間短,僅3-6個(ge)月(yue)。目前有新(xin)型的(de)(de)口服rBS/WC疫(yi)苗(miao)(重組B亞(ya)單位/霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)菌(jun)(jun)(jun)體疫(yi)苗(miao))可用(yong)(yong)于預(yu)防(fang)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan),2000年WHO關于霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)疫(yi)苗(miao)的(de)(de)意見書提(ti)出,“應考慮對(dui)有罹患霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)危(wei)險性的(de)(de)人群(qun)使用(yong)(yong)rBS/WC疫(yi)苗(miao)”。該疫(yi)苗(miao)對(dui)霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)的(de)(de)保護期為(wei)3年,國內有上海聯(lian)合賽爾(er)生物工程有限公(gong)司生產rBS/WC疫(yi)苗(miao)。
治(zhi)療主(zhu)要為及(ji)時補充(chong)液體和電解質及(ji)應用抗(kang)菌藥物如鏈霉素(su)、氯霉素(su)、強力霉素(su)、復(fu)方SMZ-TMP等。